刚买来的细胞，几代养着还行，这越养怎么状态越差？后面的实验可怎么办？经常「饲养」细胞的小伙伴，应该都遇到或听说过上述这些情况。影响细胞状态的潜在因素有很多，血清就是其中。

血清对于细胞实验的重要性毋庸置疑：提供细胞生长增殖所需的营养物质、提供结合蛋白、帮助细胞贴壁、提供蛋白酶抑制剂、调节培养体系理化特性等等功能。因此，可以这样认为：血清品质的优劣，一定程度上决定了细胞生长状态的好坏。

很多从业者在挑选血清的时候，只关注到品牌、产地，甚至会哪家打折买哪家，忽略了血清的检测指标、批次以及解冻储存情况。那么，这些细节究竟有何玄/机？下面我们将目光锁定在这三个方面，揭秘其在细胞培养过程中，导致血清使用效果出现差异的原因，希望可以给各位从事细胞培养相关工作的小伙伴，提供帮助！一、检测指标

血清对于细胞培养很重要，要保/证血清质量，需要有严格的质控，包括从外观到理化性质、细胞增殖试验和微生物检查，制定一系列的标准，以及出厂产品能符合这些标准。

以胎牛血清为例，优/质的特胎牛血清，外观应是淡棕色至橙色透明液体，无颗粒物沉淀；PH 在 6.7-8.2 之间；渗透压在 260-340mosm/kg 之间；血红蛋白含量小于 20 mg/dL；总蛋白含量在 30-50 g/L；白蛋白含量在 14-34 g/L；α、β、γ 球蛋白含量则以实际测量为准；IgG 应小于 250 μg/mL；内毒素含量应小于 10EU/mL。

这些指标直接关系到所培养细胞质量的高低。其中的典型代表就是内毒素。健康的胎牛血本身是不含有内毒素的，但是由于采集过程，运输环境，生产工艺等多种因素，商业化的成品胎牛血清不可避免地会检出内毒素。我们都知道，内毒素参与细胞的衰老、凋亡等进程。长/期用内毒素含量高的血清培养细胞，更容易影响细胞正常的生理生化功能，令细胞不知不觉进入「亚健康」的状态。细胞健康，实验结果才能更准确；细胞「萎靡不振」，实验结果也容易随之产生偏差。

因此，在挑选血清、查看检测报告的时候，应重点关注内毒素这一项，选择内毒素含量低的血清。以 Ausbian 特胎牛血清为例：经过检测，其内毒素含量稳定小于 3EU/mL，一些批次甚至小于 1.0 EU/mL！「饮食干净」，细胞状态更健康！

二、血清批次

每年全球产的胎牛血清的总量是有限的。正常情况下，胎牛血清是通过剖腹产 5-8 月龄的牛胚胎，采用心脏穿刺采血的方式，经一系列加工处理后得到的。一次采血多也就 1 到 2 瓶胎牛血清，所以它本身就要比其他血清更为稀少珍贵。

再大的血清制造商，每一批的血清产量都是有限的。不同饲养条件下、不同品种，相同流水线上操作的不同员工，都会导致同一品牌不同批次的血清略有差别。不同批号的血清在同一个实验中混用，很难保/证细胞不会因为「饮食」改变而耍耍实验数据不稳定这样的「小脾气」。

那么，该怎样解决这一难题？每次换血清都从头验证？还是和之的血清混合使用？行之有效的方法，就挑选一个安全可靠、货源充足、产品可溯源的品牌！

远慕提供Ausbian 特胎牛血清，近二十年服务过千万细胞培养用户，澳洲血源，原装/进口，供货稳定，每个批次产量 800-2000 升，保/证大多数项目两年不需换批次。不仅如此，Ausbian 特胎牛血清可提供多批次平行供应，会根据用户的不同需求，挑选符合实验需求的血清，尽可能减少血清因批次不同而产生的实验误差。

三、血清的解冻与储存

刚到货的血清应该怎样储存？血清到底要怎样解冻才能保/证活性？血清在 4℃ 冰箱能放多久？这些细节也会影响血清的使用效果。

常规储存

先，刚到货的血清，趁着它还未融化，赶紧放进-20℃ 冰箱中，避免反复冻融。当然，如果你的课题组不差钱，-80℃ 冰箱空间充足，把血清储存进去也是没有问题的。

再来说说血清的解冻。很多从业者都习惯将血清从-20℃/-80℃ 取出后，直接丢在 4℃ 冰箱甚至是室温环境下过夜解冻。这种方法虽然看似方便省心，实则有一定的潜在风险。

科学解冻

我们都知道，在血清这种混合物中，融化速度：蛋白质等干物质 > 水这类溶剂，所以蛋白质会率/先溶解析出，而水还是结成冰的状态，导致瓶子中间会出现一根透明的冰柱，而周围则会呈现上黄下红的分层浑浊液的状态，在使用过程中很容易引起沉淀、混合不均匀、局部浓度过高等问题，影响细胞生长。

更重要的一点是，血清中珍贵的生长因子等活性物质，它们在解冻过程中，有着与细胞复苏类似的经历，都需要快速解冻才能尽可能保留生物活性。显然，4℃ 过夜这样的长时间处理，很有可能会导致一部分「营养成分」的损失，影响细胞生长。

所以，为了更好地保留血清中的活性成分，使细胞培养更稳定，我们推荐使用三步法溶解。如果是储存在-80℃ 的血清，则需提几天先转移至-20℃ 冰箱中（至少 24 小时），再使用三步法溶解，避免温差过大使血清失活。

需要特别提醒的是，此方法通用，适用于所有培养基，在水浴过程中，血清的平面要完/全浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动瓶身，使血清混匀，但摇动中尽量不要产生泡沫！

彻/底解冻血清后，可以根据实验需求，将其分装，保/证每一份够一次使用量即可，比如：25 ml/管、50 ml/管等。密封好后赶紧放回-20℃ 冰箱继续储存。需要配制培养基的时候，再从-20℃ 冰箱中取出一管来解冻使用（/好能全部配成培养基，不要有剩余），可以有效避免反复冻融的问题（遵循现用现配、现配现解冻的原则）。配好的培养基可以放到 4℃ 冰箱进行储存。

看到这里，问题又来了，配好的培养基，或者剩下的那一点点血清，能在 4℃ 冰箱里放多久呢？先给出我们认为比较合理的答案，再来解释原因：7 天

一般情况下，已经解冻的血清，无论是配成完/全培养基还是在冰箱里备用，都不要超过一周（7 天），原因也很简单，存放太久，生长因子等物质容易失活，而且比较容易受到污染，影响实验结果。

其实，无论是日常使用，还是销售运输过程中，血清都忌讳反复冻融，不仅容易析出沉淀，造成细胞污染的假象，给实验人员造成比不要的困扰，而且在一些对营养需求比较特殊的细胞而言，反复冻融析出大量沉淀的血清，可能不足以供给其营养，导致细胞出现生长不良等状况。

因此，选择一款运输途中储存条件有保障的血清，至关重要。Ausbian 特胎牛血清及其同系列血清产品，出厂后，全程冷链运输，对反复冻融 Say No！

综上所述，想要保/证细胞状态、实验数据的稳定，一款优/质的血清必不/可少。远慕可提供各种合适的特胎牛血清，详情关注我们官网哦！

原创作者：上海远慕生物科技有限公司