猪主要组织相容性复合体Ⅱ试剂盒使用说明书_技术文章

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猪主要组织相容性复合体Ⅱ试剂盒使用说明书
阅读次数：623 发布时间：2015/11/30 9:44:40

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猪主要组织相容性复合体Ⅱ 试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 48T

25 ng/L -800 ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ）水平。用纯化的猪主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ），再与HRP标记的主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中猪主要组织相容性复合体Ⅱ类（MHC-Ⅱ）浓度。

猪主要组织相容性复合体Ⅱ试剂盒组成

1	20倍浓缩洗涤液	20ml×1瓶	7	终止液	3ml×1瓶
2	酶标试剂	3ml×1瓶	8	标准品（1600ng/L）	0.5ml×1瓶
3	酶标包被板	12孔×4条	9	标准品稀释液	1.5ml×1瓶
4	样品稀释液	3ml×1瓶	10	说明书	1份
5	显色剂A液	3ml×1瓶	11	封板膜	2张
6	显色剂B液	3ml×1/瓶	12	密封袋	1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

800 ng/L	5号标准品	150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
400 ng/L	4号标准品	150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
200 ng/L l	3号标准品	150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
100 ng/L	2号标准品	150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
50 ng/L	1号标准品	150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

猪主要组织相容性复合体Ⅱ注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

原创作者：上海远慕生物科技有限公司

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