大鼠睾酮（T）elisa试剂盒原理和说明书

    大鼠睾酮（T）ELISA试剂盒原理操作注意事项

    1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

    2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

    3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取50μL加样即可。

    4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

    5.所有液体组分使用前充分摇匀。

    试剂盒组成

    名称96孔配置48孔配置备注

    微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无

    标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无

    生物素1mL0.5mL无

    检测抗体-HRP10mL5mL无

    20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

    底物A6mL3mL无

    底物B6mL3mL无

    终止液6mL3mL无

    封板膜2张2张无

    说明书1份1份无

    自封袋1个1个无

    注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、20、40、80、160、320pg/mL

    试剂的准备

    20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓

    冲液加19份的蒸馏水。

    洗板方法

    1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

    2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

    大鼠睾酮（T）ELISA试剂盒原理操作步骤

    1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

    2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

    3.待测样本孔先加生物素10μL，再加待测样本50μL；

    4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

    5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

    6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

    7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

    结果判断

    绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

    大鼠睾酮（T）ELISA试剂盒原理试剂盒性能

    1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

    2.灵敏度：检测浓度小于1.0pg/mL。

    3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

    4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

    5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司