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分析ELISA实验操作过程中影响结果的原因及解决办法
阅读次数：608 发布时间：2016/8/16 10:30:51

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分析ELISA实验操作过程中影响结果的原因及解决办法

在实际操作中，除了选择优良的试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

现在让远慕生物王经理为您分析下ELISA实验操作过程中影响结果的原因并给出了相对应的解决方法如下：
一：加样
可能原因：
1.血清或血浆标本分离不好即进行加样；
2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；
3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法：
1.标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟;若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2.加样后及时放入孵箱。
3.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

二：孵育
可能原因：
1.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底;
2.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
解决办法：
1.贴封片或加盖；
2.按说明步骤严格控制操作时间。

三：洗板
可能原因：
1.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底;洗板针堵塞，抽吸不完全;洗板不畅，导致洗板效果差。
3.反应板过多造成洗板等待时间长。
解决办法：
1.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干; 2.合理安排，或多用几台洗板机。
四：显色

可能原因：
1.显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；
2.加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
解决办法：
1.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；
2.加样时保持显色剂不外流；

原创作者：上海远慕生物科技有限公司