肝素-琼脂糖凝胶
1 简介
肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖,将它偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上,该填料具有很高的物理化学稳定性。
肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合,所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质的纯化。
本产品稳定性好,基团脱落少,使用寿命长,使用方便,应用广泛。
2 亲和填料特性
特点 | 基团脱落少,结合特异性强 |
基质 | 6%的交联琼脂糖凝胶 |
配基 | 肝素 |
配基密度 | 5mg/ml |
吸附载量 | 2-3mg 抗凝血因子Ⅲ(AT Ⅲ )/ml |
亲和填料的颗粒大小 | 45-165μm |
流速 | 300cm/h |
pH范围 | 4-10,在位清洗时pH范围可到3-13 |
使用温度 | 4℃~常温 |
保存温度 | +4~8℃ |
保存液体 | 20%乙醇 |
3 适用范围
肝素琼脂糖凝胶用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。
4 亲和填料应用的注意事项:
(1)该凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温,然后再装柱,以免产生气泡影响柱效;
(2)吸附:20-50mM,pH7.4-8.0的缓冲液,为避免离子交换的干扰,缓冲液中可以适当加50mM-100mM的NaCl,,*常用的为Tris-HCl缓冲液;
(3)洗脱:可以用pH7.4-8.0的缓冲液加0.2-2M进行阶段或者线性洗脱;
(4)上样样品必须与平衡柱子的缓冲液的pH、电导相同;
(5)不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行;
(6)肝素琼脂糖凝胶亲和填料的再生处理方法:先用0.1M Tris-HClpH7.0缓冲液洗3个柱床体积,然后用0.1M NaOH含2MNaCl流洗3个床体积,*后用20%乙醇洗 3个床体积即可。长时间用酸碱洗填料会是填料的吸附能力下降,所以清洗要尽量缩短时间;
(7)该亲和填料保存条件为20%乙醇,4-8℃。