大鼠白细胞介素6（IL-6）ELISA检测试剂盒使用说明书_技术文章

技术文献

大鼠白细胞介素6（IL-6）ELISA检测试剂盒使用说明书
阅读次数：567 发布时间：2016/10/26 15:56:27

分享到：

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

上海远慕elisa试剂盒供应商！

大鼠白细胞介素6（IL-6）ELISA检测试剂盒使用说明书

检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ ELISA ）。往预先包被白细胞介素 6 （ IL-6 ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品 、 HRP 标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素 6 （ IL-6 ）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后， 3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆： EDTA 、柠檬酸盐或肝素抗凝。 3000 转离心 30 分钟取上清。
3. 细胞上清液： 3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。 3000 转离心 10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20 ℃ ，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品
1. 酶标仪（ 450nm ）
2. 高精度加样器及枪头： 0.5-10uL 、 2-20uL 、 20-200uL 、 200-1000uL
3. 37 ℃ 恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8 ℃ ，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，*终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成
名称          96孔配置          48孔配置           备注
微孔酶标板     12 孔 × 8 条      12 孔 × 4 条        无
标准品           0.3mL*6 管         0.3mL*6 管         无
样本稀释液          6 mL              3 mL             无
检测抗体 -HRP       10mL               5mL             无
20 × 洗涤缓冲液    25mL              15mL       按说明书进行稀释
底物 A              6mL                3mL             无
底物 B              6mL                3mL             无
终止液              6mL                3mL             无
封板膜              2 张               2 张            无
说明书              1 份               1 份            无
自封袋              1 个               1 个            无
注：标准品（ S0-S5 ）浓度依次为： 0 、 10 、 20 、 40 、 80 、 160 p g/mL

试剂的准备
20 × 洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1 ： 20 稀释，即 1 份的 20 × 洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350 μ L ，浸泡 1min ，洗板 5 次。

操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4 ℃ 。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μ L ；
3. 样本孔先加待测样本 10 μ L ，再加样本稀释液 4 0 μ L ；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（ HRP ）标记的检测抗体 100 μ L ，用封板膜封住反应孔， 37 ℃ 水浴锅或恒温箱温育 60min 。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。
7. 每孔加入终止液 50 μ L ， 15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的OD 值。

结果判断
绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司