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    动物细胞培养实验的基本要求

    ①清洗玻璃制品时，浸酸之后一定要用自来水冲洗10～15次。因为残存的洗液对细胞黏附有很大影响。清洗塑料制品时要用棉花或柔软纱布擦洗。千万不要用硬毛刷，否则损害塑料表面后细胞不易贴壁。加样器头(Tip)和离心管(Tube)一定要用超声清洗处理后逐个清洗．如没有洗净会影响下一次使用的效果。
    ②干热灭菌时，应在白天使用烤箱，并不断观察，以免发生意外。当温度超过100℃时，不能玎开烤箱门。器皿烤完后，待温度降至100℃之下才能开烤箱门。金属器械、橡胶和塑料制品不能使用干热灭菌方法。
    ③重高压灭菌后器皿务必晾干或烘干，以防包装纸潮湿发霉：
    ④牛血清、大部分培养基、胰酶和一些生物制剂(如TdR，秋水仙素，谷氨酰胺，异硫氰酸胍，MOPS等)是有机溶液，均不能高压。
    ⑤滤过除菌时，滤器在使用前先装好滤膜(有时可在上面加一层定性滤纸)，包好，经高压灭菌后才能使用。滤过酶类制剂时应待滤器温度降至室温后再进行。过滤时压力不宜过大，压力数字以2为宜。压力太大时微孔滤膜可能破裂，或使某些微生物变形而通过滤膜。装滤膜时位置要准确。另外滤器包装时，螺钉不要拧得太紧，以防高压蒸汽不能进入，待高压灭菌之后，再拧紧使用。
    ⑥使用化学消毒法时，配制。75％，酒精应用卫生级，不要用化学纯、分析纯和优质纯酒精。来苏儿水不能用于皮肤消毒，它对皮肤有刺激性。空气消毒时，所有的物品要事先准备齐全并使消毒者有较方便的退出途径。因为甲醛或乳酸加热后放出的蒸气对人的角膜和呼吸道上皮有严重的刺激和伤害作用。
    1)实验前准备
    实验前必须分门别类地制订操作卡片，如清洗卡、消毒卡、细胞常用液(细胞培养液、BSS液、消化液)配制卡、牛血清检测分装卡、细胞原代和传代操作卡等：各卡片上注明实验所需器材的名称、规格、数量、操作要领和实验注意事项等。实验前应按卡片收集、清点所需用品，一并放入超净台内，这样可避免操作时因物品不全而往返拿取所造成的污染：同时，根据每个实验的要求，准备好瓶管支架、器械消毒盒等。实验器材准备数要大于实验使用数，瓶盖数要大于瓶数。这样才能有条不紊地做实验，也减少了忙乱操作所引起的污染。
    2)无菌室和操作室消毒
    无菌室内每周用乳酸蒸气(或过氧乙酸)加紫外线消毒1～2次。实验前，将实验器材放入超净台内，打开超净台紫外线灯，同时启动超净台风机，40min后消毒完毕，关闭紫外线灯。这样，超净台内空气被净化，超净台面构成相对无菌的环境。
    3)无菌操作要求
    ①手指不能触及器材使用端。如触及，器材需更换或烧灼后再使用(如瓶口)。
    ②减少手与器材的接触面，学会手指操作。
    ③一切操作，如打开或封闭瓶口，安装吸管、注射器等，都要在火焰前方进行。瓶口、吸管、注射器使用前要经过火焰消毒后使用。
    ④瓶口顺风斜放在支架上。试剂用后立即封闭瓶口。瓶口长时间敞开会增加落菌的机会。
    ⑤不同的细胞同时操作时，要专管专用，并要勤换吸管，防止扩大污染和交叉污染。
    ⑥瓶口液滴不能倒回瓶内。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再经火焰消毒。
    ⑦操作者动作要准确敏捷，尽量避免空气流动。
    4)实验中操作要求
    洗手、着装与外科临床要求相同。双手用肥皂洗净后浸泡于消毒液中，并用75％的酒精擦拭。细胞培养用液从冰箱取出，试剂瓶口和外壁经酒精纱布擦洗后入超净台。超净台面要用酒精纱布擦拭。超净台上的物品面布局合理，污物废液缸、酒精棉球缸在右侧位，酒精灯在中央位，试剂瓶在左侧位。拆除大包装，点燃酒精灯(95％酒精)。火焰无色或微黄色表示酒精杂质少，酒精燃烧完全(不能使用废酒精或工业酒精，这类酒精燃烧时产生的化学物质易附着到吸管或其他瓶、皿上，带入培养液中会伤害细胞)。浸泡。75％酒精中的金属器械用台面消毒镊子取出，经无菌干纱布擦拭后，迅速通过火焰(器械不能在火焰中灼烧过长时间)，冷却后使用，避免烫伤细胞。细胞培养液、牛血清、酶液的吸管，使用后不能再用火焰消毒，因为吸管中残留的培养液被烧焦碳化，再使用时，会把有害碳化物带人培养液中毒害细胞。操作中手指被污染时，可用酒精纱布或棉球擦拭。在实验过程中，不要面向操作台讲话或咳嗽，避免将唾沫中微生物带入超净台内，污染空气。实验者离开超净台时，立即用肘关节关闭侧窗口．避免无菌室内细菌随空气流人净化操作区。
    5)实验后要求
    实验完毕，关闭超净台风机和电源，未使用过的器材放入饭盒内，用过的玻璃器材投入清水中浸泡，包装纸叠卷，绳成束分类归入，*后，超净台面用酒精纱布或棉球擦拭，紫外线消毒。
    6)注意事项
    无菌操作离不开火和酒精，操作中避免事故发生。要用打火机点火。火柴点火时，火星德灭后投入废缸内(缸内有废酒精棉球)。酒精溅出台面或瓶外壁时，立即擦干；一旦发生着火事故，立即关闭超净台风机，用饭盒、湿布扑灭火焰。

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