上海远慕阐述：ELISA实验血液样本收集方法_技术文章

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上海远慕阐述：ELISA实验血液样本收集方法
阅读次数：697 发布时间：2016/12/16 11:40:05

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    ELISA实验血液样本收集方法：
    全血根据收集的条件，分成不抗凝和抗凝两种。同时，不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清；抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
    标本的存放温度及时间，血清、血浆及细胞分离的方法步骤也是分析前影响检验结果的重要因素。抽血后，血细胞因代谢需要，要消耗掉部分营养成分，故对这些成分进行测定时，需及时地离心以分离掉细胞成分。
    采血前个体的准备情况，如空腹时间的长短、采样时间的确定及采血时患者的姿势；止血带应用时间，输液情况，体育运动，抗凝剂及稳定剂的选用；标本的处理等均可影响到某些检验指标的水平。故标本采集过程应标准化，以限度地减少分析前误差。

    一、不抗凝收集血清：
    1、无添加剂的干燥空管收集:
    血管内壁均匀涂有防止挂壁的药剂(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固，等血清自然析出后，离心使用。主要用于血清生化(肝功、肾功、心肌酶、淀粉酶等)、电解质(血清钾、钠、氯、钙、磷等)、甲状腺功能、药物检测、艾滋病检测、肿瘤标志物、血清免疫学检测。
    亦可直接用干燥EP管收集全血，充分静置使得红细胞充分自然凝固后，离心分离出血清待用或保存。
    2、用促凝管收集:
    采血管内壁均匀涂有防止挂壁的硅油，同时添加了促凝剂。促凝剂能激活纤维蛋白酶，使可溶性纤维蛋白变成不可溶性的纤维蛋白聚体，进而形成稳定的纤维蛋白凝块，如果想快点出结果时，可采用促凝管。一般静置半小时到1小时，直接离心分离出血清待用或保存,常用于急诊生化。
    3、含有分离胶及促凝剂的采血管收集：
    用促凝管的优点：
    ①、加速红细胞的凝固，无需长时间的静置；
    ②、带有分离胶，有效的将血清分离出来，更好的避免溶血；
    收集血清的缺点：
    ①、需要红细胞的充分凝固，所需静置时间较长；
    ②、分离出的血清相对较少，1ml全血不抗凝约只能分离出0.2-0.3ml血清。

    二、抗凝收集血浆：
    收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接离心分离血浆待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。
    1、肝素抗凝：
    *常用的抗凝剂，一般情况下对相关指标都不会有干扰，同时抗凝比例较大（抗凝剂：全血=1:30），对血液基本没有稀释影响。
    2、EDTA抗凝：
    乙二胺四乙酸是一种氨基多羧基酸，可以有效地鳌合血液中的钙离子，鳌合钙会将钙从
    反应点移走将阻止和终止内源性或外源性凝血过程，从而防止血液凝固，与其他抗凝剂比较而言，其对血球的凝集及血细胞的形态影响较小，故通常使用EDTA盐(2K、3K、2Na)作为抗凝剂。用于一般血液学检查，不能用于血凝、微量元素及PCR检查。
    3、枸橼酸盐抗凝:
    柠檬酸钠通过作用于血样中钙离子鳌合而起抗凝作用，国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐为3.2％或3.8％，抗凝剂与血比例为1：9，主要用于纤溶系统(凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血酶时间、纤维蛋白原)。采血时应注意采足血量，以保证检验结果的准确性，采血后应立即轻轻颠倒混匀5-8次。由于抗凝比例较小（抗凝剂：全血=1:9），对血液有一定的稀释，一般不建议。

    三、收集血清、血浆所用离心转速：
    分离血清或血浆，根据种属不同，离心转速也有差异,推荐离心转速为:
    ①、小鼠：一般1000-1500转/分，离心8-10分钟；
    ②、大鼠、兔子：一般2000-2500转/分，离心8-10分钟；
    ③、人：一般2500-3000转/分，离心8-10分钟。

    四、高脂及溶血因素的影响:
    溶血的影响:
    溶血对某些检验指标的的影响不仅取决于所采用的方法，也取决于所用的分析仪器。采用双波长测定法可在一定程度上消除Hb的颜色干扰，然而Hb的干扰并不能完全消除，尤其是当Hb可以与采用的试剂发生作用时。总的来说，轻微的溶血，对大多数临床化学指标的测定方法无明显干扰。严重的溶血，可能有两方面的影响：（1）测定成分在红细胞内的浓度高于血浆时，导致测定结果偏高；（2）测定成分在RBC内浓度低于血浆时，产生轻微的稀释效应。

    五、全血或红细胞的收集及保存
    测定全血或者是红细胞中相关指标的话，首先需要收集抗凝全血。
    全血：收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，可直接定量吸取全血，用冷蒸馏水制备溶血液后用于不同指标的检测；也可定量吸取全血，转入EP管，低温冻存（温度越低越好），测定之前解冻并按比例加入冷蒸馏水制成溶血液用于检测。红细胞：收集抗凝全血，轻轻颠倒充分抗凝后，直接离心吸走血浆，留下层红细胞，加入3倍体积的生理盐水，轻轻颠倒混匀，500～1000转/分,离心5分钟，弃上清留沉淀红细胞,重复2～3次,至上清液无色为止（洗涤红细胞）。
    ①、直接定量吸取红细胞，按比例加入冷蒸馏水制成溶血液待测；
    ②、定量吸取红细胞，转入EP管，立即低温冻存（温度越低越好），测定之前解冻，并按
    比例加入冷蒸馏水制成溶血液用于检测(解冻后部分红细胞会破裂,因此样本冷冻保存之前必须进行定量)。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司