上海远慕是国内elisa试剂盒优质供应商，本司代理销售不同ELISA试剂盒品牌的进口/国产ELISA试剂盒，专业供应科研实验所需的培养基，抗体，动物血清血浆，标准品对照品" >标准品对照品，化学试剂，酶联免疫试剂盒，白介素试剂盒，金标检测试剂盒，微生物，蛋白质，ELISA种属涵盖广，凭借多年行业经验，完善的售后服务，高质量的产品，赢得客户一致好评，欢迎来电咨询！    人谷草转氨酶（GOT）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书

    本试剂盒仅供科研使用。

    本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆及相关液体样本中谷草转氨酶（GOT）的含量。

    有效期：6个月

    保存条件：2-8℃

    实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷草转氨酶（GOT）水平。

    用纯化的人谷草转氨酶（GOT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷草转氨酶（GOT），再与HRP标记的谷草转氨酶（GOT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷草转氨酶（GOT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人谷草转氨酶（GOT）浓度。

    试剂盒组成试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存说明书 1份 1份 R.T.封板膜 2片（48） 2片（96） R.T.密封袋 1个 1个 R.T.酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存标准品：

    1800 pg/ml 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

    标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃

    保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃

    保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃

    保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃

    保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃

    保存终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃

    保存浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃

    保存样本处理及要求

    1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

    2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

    3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

    4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

    6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

    7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

    操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1500 pg/ml，1000 pg/ml，500 pg/ml，250 pg/ml，125pg/ml）。

    2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

    3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

    5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

    6. 加酶：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外。

    7. 温育：操作同3。

    8. 洗涤：操作同5。

    9. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

    10. 终止：每孔加终止液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

    11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    注意事项1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

    2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

    3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

    4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。

    5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6. 底物请避光保存。

    7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

    8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9. 本试剂不同批号组分不得混用。

    10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司