马丙二醛（MDA）ELISA试剂盒操作说明书_技术文章

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马丙二醛（MDA）ELISA试剂盒操作说明书
阅读次数：716 发布时间：2017/10/9 10:48:43

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马丙二醛（MDA）elisa试剂盒操作说明书

中文名：马丙二醛(MDA)ELISA试剂盒
别名：马丙二醛(MDA)ELISA Kit
供应商：上海远慕
规格：48t/96t
保存温度：2-8℃
有效期：6个月
检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
服务承诺：工作时间内免费技术咨询和指导，提供来样检测及免费代测服务，保证实验结果的有效性。
研究领域：炎症研究、神经生物学、肿瘤研究、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。
适用范围：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。
特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。
用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

马丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒性能：
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度：检测浓度小于（参考说明书）
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月

马丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒组成及试剂配制：
1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

马丙二醛（MDA）ELISA试剂盒操作说明书样品收集、处理方法：
1、血清－－－－-室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心
2、血浆－－－－-应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心
3、细胞培养上清－－-检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清
4、组织标本－－－－-切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用
5、培养细胞－－－－- 检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

马丙二醛（MDA）ELISA试剂盒操作说明书操作步骤：
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl，37℃，60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。

马丙二醛(MDA)ELISA试剂盒注意事项：
1.不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照胰岛细胞抗体(ICA)检测试剂盒(人大小鼠等）说明书严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性.
2.若不同批号胰岛细胞抗体(ICA)检测试剂盒(人大小鼠等）的不同组分(A液或酶工作液)，或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。
3.反应时间的误差，做大量标本时，孔和*后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。
4.临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。
5.加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。

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