血红素铁原子为二价与O2、卟啉的4个N，与珠蛋白的组an酸残基（咪唑）结合，成为八面体的络合物结构。它与游离的血红蛋白不同，是低自旋（spin）物质，吸收光谱也类似细胞色素还原型。氧分压和氧合血红蛋白的生成百分率（%）的图即结合曲线（解离曲线），由于血红素间的相互作用的变构（alloste－ric）效应而呈S型。氧合血红蛋白的酸性比血红蛋白强，生成时放出H+，将此称为库效应。可以认为，它在肺中与氧结合并放出二氧化碳；在组织中在乳酸的生成与氧的游离的相互关系具有意义。
 

血红蛋白测定

（一）检测原理血液中血红蛋白以各种形式存在，包括：氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白（Hi）或其他衍生物。采用比色法测定，包括：氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法、十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS）测定法、叠氮高铁血红蛋白（HiN3）法、碱羟血红蛋白法、溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法等。

1.HiCN测定法原理：血液中除硫化血红蛋白（SHb）外的各种Hb均可被高铁qing化钾氧化为高铁血红蛋白，再和CN一结合生成稳定的棕红色复合物-氰化高铁血红蛋白，其在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定该处的吸光度，经换算即可得到每升血液中的血红蛋白浓度，或通过制备的标准曲线查得血红蛋白浓度。

2.SDS测定法原理:血液中除SHb外的各种Hb均可与低浓度SDS作用，生成SDS-Hb棕红色化合物，其吸收曲线波峰在538nm，波谷在500nm，肩峰在560nm，用分光光度计测定波峰处吸光度，经换算可得到每升血液中的血红蛋白浓度。

（二）方法学评价

1.HiCN法:1966年被ICSH推荐为参考方法。该法具有操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。其致命的弱点是qing化钾（KCN）试剂有ju毒，使用管理不当可造成公害。

2.SDS测定法：该法具有操作简单、呈色稳定、准确性和精/确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未/后确认，不能直接用吸光度计算Hb浓度，而且SDS试剂的质量差异较大会影响检测结果。

3.HiN3测定法：该法优点与HiCN测定法相似，/大吸收峰在542nm，显色快，结果稳定，试剂毒性仅为HiCN测定法的1／7，但仍存在公害问题。

4.碱羟血红蛋白（AHD575）测定法：该法试剂简单，呈色稳定，无公害，吸收峰在575nm，可用氯化血红素作为标准品。但仪器多采用540nm左右滤光板，限制了此法使用。

5.CTAB血红蛋白测定法该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，适用于仪器上自动检测Hb和白细胞。缺点是测定结果的准确度和精密度不佳。

6.多参数血细胞分析仪:优点是操作简单、快速，同时可获得多项红细胞参数，血红蛋白测定原理与手工法相似，仪器法测定精度（CV）约为l%。

（三）质量控制

1.样本异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度，干扰Hb测定。

2.采血部位：部位不同，结果不同，静脉血比毛细血管血低10%～15%。

3.结果分析：测定值假性增高的原因是稀释倍数不准、红细胞溶解不当、血浆中脂质或蛋白质量增加。

4.HiCN参考液：是制备标准曲线、计算K值、校准仪器和其他测定方法的重要物质。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司