实验方法原理：H2O2在240 nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240）随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

    实验步骤：

    一、仪器与用具

    紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；

    二、试剂

    0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；

    0.1mol/L H2O2（用0.1mol/L高锰酸钾标定）。

    三、方法

    1. 酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。

    2. 测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。

    紫外吸收法测定H2O2样品液配置表


    25℃预热后，逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。

    3.结果计算：以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）


    注意事项：凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰

原创作者：上海远慕生物科技有限公司