对于养细胞的人来说，可谓是谈 「污」色变，任何时候听见细胞污染晴空万里立马暴风雨，而细胞污染又是养细胞过程中，尤其是新手经常遇到的问题。

细胞污染是一个很广的范围，微生物的种类更是各种各样，不同的污染的原因不同处理也不同，因此掌握对常见细胞污染的识别至关重要。

自己也是从刚开始养细胞 3 天一个小污染 7 天一个大污染过来，也积累了些经验，自己整理归纳了一下，希望对养细胞的同学有所帮助。

讲细胞污染之前需要说明一点，就是对待细胞大家一定要给予极大的重视，因为细胞相关的实验细胞的状态是很重要的。

对于确定污染的细胞的办法就是及时丢弃，积极排查细胞污染的原因，除非是特别重要的细胞才会去抢救，而且抢救污染的细胞本来就有一定的风险，搞不好还可能会污染别的细胞。

下面进入正题，一般细胞污染大概分为细菌污染、真菌污染、支原体污染还有说法不一的黑胶虫污染等。每种污染的特征都很明显，因为微生物种类实在太多，所以我就选取比较典型和常见的污染讲下。

识别细胞污染的步就是从培养箱拿出细胞后观察细胞培养液的颜色，以常用的 DMEM 基础培养液为例，一般使用 DMEM 配制的培养液的颜色为鲜红色，而且是澄清透亮的，注意透亮不代表没有颜色。

但是大多数情况下会看到以下几种颜色，1 号管颜色偏紫一般原因是培养基 ph 升高置 ph 升高因有两个一个是培养液在冰箱放置太久，培养液中的二氧化碳逸出，第二个是培养箱没二氧化碳了，而且整个培养箱的细胞都会出现一样的颜色。

2 号管颜色有点偏红，一般是细胞生长消耗营养物质导致液 ph 稍微降低。

3 号和 4 号管颜色发黄，导致培养液颜色发黄的原因是培养液中的营养被大量消耗，培养液 ph 降低导致，导致 ph 降低的原因一般是细胞生长太快太满，提醒自己需要给细胞换液或者传代，但是有时细胞密度低生长速度缓慢也会出现这种情况，这时候就要怀疑是不是细胞污染了，除了细胞以外有其他东西在消耗着培养液的营养。

5 号管培养液呈肉眼可见的浑浊，这种情况一般就是细菌污染，具体判断还需要结合镜下的特征。

第二步就是去导致显微镜下结合镜下特征判断：

细菌污染

特征：培液会变黄，而且是浑浊的黄色，镜下观察不到正常细胞形态，镜下遍布细沙样的黑点。细菌污染一定要及时查找原因，如果换液的细胞全部污染，就要怀疑是不是培养液污染，或者使用的器械污染。

如果传代的细胞全部污染，也要怀疑培养液的问题，但是不要忽略了胰酶的问题。如果个别皿污染，有可能是一不小心蹭到或者枪头碰到非无菌区域。

怀疑是胰酶或者是培养液的问题，可以空培养，取空皿只加入怀疑的胰酶或者培养液培养，第二天观察。

霉菌污染

特征：培液不变浑浊但是会变黄，一般肉眼可见培养液中有团块的霉菌菌落，镜下呈细丝竹节管状，有菌丝结构。霉菌梅雨季节多见，一般霉菌污染及时扔掉，彻底清洁培养箱

白色念珠菌污染

特征：培液颜色没有明显改变，污染严重会变黄，但是是澄清的黄不变浑浊，镜下观察到好多像球形的亮点，多的话会聚集成葡萄串样。白色念珠菌污染不要抢救立马扔了，救也救不好，而且白色念珠菌会互相通过孢子传染。

杆菌污染

特征：镜下看到许多杆状的细菌，培液颜色没有明显改变。

支原体污染

特征：支原体污染很隐蔽，主要表现为细胞在生长速度变慢，细胞状态形态改变，而且不断死亡，镜下没啥改变，有时可见许多黑色的细胞碎片。检测支原体污染可以使用支原体检测试剂盒进行检测，现在市面上抗支原体的药很多，效果也都可以。不确定是不是支原体污染可以使用支原体药试一下，如果细胞状态明显改善，有可能就是支原体污染。

黑胶虫污染

特征：很邪乎，各种说法都有，一般认为是镜下许多黑点在不断布朗运动，刚开始对细胞没啥明显影响，多时会影响细胞的生长。一般也治不好，就扔了吧。现在主流认为黑胶虫是血清的问题，可以从新换一批次血清试一下。

其实污染也没有想象中的那么可怕，在做好消毒灭菌工作的基础上，提高自己的无菌意识和操作技术才是*为重要的。

从进入细胞培养室的穿着到超净台里物品的摆放都大有学问，对于刚养细胞的新手跟着师兄师姐养细胞是个很好的方式，刚开始不要着急上手，看师兄师姐操作时重点看他们的物品摆放、培养皿培养板开盖的方式和放置、吹打细胞的手法等小细节。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司