问： 现在刚刚开始做干细胞，想自己计数白细胞，用的是Sigma的0.4%台盼蓝，1:1混合，从2分钟开始细胞死亡越来越多，例如2分时有10%死亡，到5分钟就死一半了，到底是几分钟计数*准确呢？& 还有一个问题，看到有1:1使用，也有1:9的，用哪种浓度呢？

答1 ：0.4%应该是1:1混合的，1:9的是4%浓度的，这个染色的时间不应该太长的，因为对于胎盘蓝这种大分子，不能渗透就如细胞膜，但是如果染色时间过长，会因为胞吞作用进入细胞里，所以时间长了之后看到很多细胞都是蓝色，不一定是细胞死了，可能是台盼蓝进去了，我们一般混合一下就在显微镜下看了，要是死细胞，细胞膜有破裂，细胞很快就蓝了。

答2： 采用细胞计数仪计数，这样可以快速有效的将单位体积的总细胞数、活细胞数、死细胞数及细胞活性直接读出，如果用目测法只能将细胞总数大致估计出。

答3 ： 3分钟内观察，是和细胞混一下就滴出来观察，大于3分钟活细胞也会被染上不准的

答4 ： 台盼蓝母液是0.4%， 用的时候1:10稀释使用（1:1使用的话细胞受不了的），5分钟之内数完。
还有就是评判细胞的死活时，染成蓝色或者镜下不透亮的细胞都是死细胞！

答5： 混合后要在3分钟内计数完毕，要不然细胞死的越来越多，结果不准。如果时间上来不及的话，可以先在显微镜下拍照再计数。

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