1.冷冻管应如何解冻？
取出冷冻管后，须立即放入 37 ℃ 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管的爆裂。

2.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除 DMSO？
除少数特别注明对 DMSO 敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有 10~15 ml 新鲜培养基的培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除 DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。
 
3.可否使用与原先培养条件不同的培养基？
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

4.可否使用与原先培养条件不同的血清种类？
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5.何谓 FBS，FCS，CS，HS？
FBS （fetal bovine serum） 和 FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，两者都是指胎牛血清， FCS 是错误的使用字眼，请不要再使用。CS （calf serum） 则是指小牛血清。HS （ 则是指马血清。

6.培养细胞时应使用 5% 或 10% CO2？或根本没有影响？
一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统，而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时，细胞培养时应使用 10% CO2；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时，则应使用 5% CO2 培养细胞。

7.何时须更换培养基？培养基中是否须添加抗生素？
视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。
除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
一 ℃ 16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽 vapor phase 长期储存。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司