一、标准菌株的概念及其应用
1.1标准菌株概念
1)GB/T 27405-2008
实验室质量控制规范食品微生物检测:
①标准培养物:标准菌株、标准储备菌株和工作菌株的统称。
②标准菌株:至少定义至属或种水平的菌株。按其特征进行分类和描述,有明确的来源。
③标准储备菌株:标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。
④工作菌株:由标准储备转接后获得的同种菌株。
1.2标准菌株的应用:
各种标准、国家标准、行业标准及企业标准等的相关微生物检测,用于验收培养基(包括试剂盒)、验证方法和评估实验操作。
二、微生物菌种管理的相关流程
2.1菌株的采集:
实验室用菌种一是到国家法定机构采购,二是购买ATCC菌种,三是科研中菌种交流。不管是哪种来源,均统一采集。采集中严格按照规范执行。要求包装可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保/证菌种合格和环境安全。采集中要有菌种传代标识。选择有资质的标准菌株的合格供应商,每批标准菌株必须附带有供应商的合格证或检测报告或说明书,来证明所采购的标准菌株是合格的。
2.2标准菌株和验收
实验室收到标准菌株,先应进行符合性感官检查,记录菌株号和标准菌株来源途径信息,确保溯源性清楚。同时还应记录标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等情况。
2.3冻干标准菌株的复活
2..3.1开启产品包装:先用70%酒精棉擦拭外包装,从凹口处撕开产品外包装,撕掉标签上的拉片,将其贴于菌株接收、保存记录序号面。
2.3.2复活:选择合适的培养基和培养条件(根据生产商说明或有关技术通则见附录)进行复活。菌种的/次活化/好是在非选择性琼脂培养基上,除非特殊情况或特别推荐,一般不用液体培养基。冻干菌株的传代次数不得超过5代,从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。
捏管帽处安瓿瓶(仅一次)使其释放水合液体。垂直握住安瓿瓶并轻拍之,使液体流入含小球的管底。通过挤捏压碎小球使其与液体混合,立即将拭子浸于水合液体。挤压并旋转拭子,接种于初培养平板,接种圈的直径约为25mm,用一无菌接种环在先接种区域划线10-20次,促使分离出单菌落。同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管,副溶血性弧菌接种3%氯化钠菌胰蛋白胨大豆肉汤管。将接种好的平板和管立即进行培养。细菌培养温度通常为25℃或37℃。多数冻干菌株会在几天后长出,但是少数菌会表现出延滞期延长的现象,需要将正常培养时间加倍。复活后的菌株为F1代。
原创作者:上海远慕生物科技有限公司