RIPA 裂解液用于样品总蛋白提取已经有三十多年的时间，但是他到底适不适合你的下游实验，这个事你考虑过吗？比如 RIPA 提到的蛋白图谱是否完整？ 和其他方法对比提取的蛋白有哪些差异？使用时有没有潜在问题？一句话：RIPA 到底靠不靠谱？

    研究方法

    分别使用 RIPA 和 2%SDS+超声提取未激活 T 淋巴细胞（Lanes 1 和 5）和激活的 T 淋巴细胞（Lanes 2-4 和 6-8）裂解细胞提取总蛋白

    WB 进行 caspase-3, caspase-7, parp ａnd GD1 活性检测

    主要发现

    p24, p20 存在于 RIPA 提取的蛋白中，但 Laemmli 裂解液提取的蛋白中却不存在。证明了 RIPA buffer 提取蛋白时会人工激活 caspase-3 ａnd caspase-7。

    划重点：细胞凋亡研究时要慎用 RIPA

    1、 研究方法

    培养的结肠癌细胞分别使用 RIPA 和 NP-40 提取

    用特异性单克隆抗体进行免疫共沉淀

    使用同样量 pp60-src 沉淀蛋白进行激酶检测

    主要发现

    使用 RIPA 提取蛋白，激酶活性比 NP-40 提取高了七倍

    RIPA buffer 人工增加激酶活性

    划重点：激酶活性检测时要慎用 RIPA

    2、 研究方法

    研究使用化学诱导和无诱导的人细胞系，总蛋白分别使用 RIPA 和柱式法蛋白提取

    蛋白通过 SDS-PAGE 分离，进行 WB 检测磷酸化蛋白的对比

    NT=细胞没有通过化学处理激活（基线水平），T=细胞通过化学激活处理。化学激活后，磷酸化蛋白（P）预期应比基线水平（NT）增加，非磷酸化蛋白（np）减少。

    3、主要发现

    通过 actin 条带强度可以证明蛋白样品是等量上样

    STAT3 在两种提取方法中显示了同样的趋势

    P56 在两种提取方法中却显示明显的不同

    离心管柱法提取蛋白获得了预期的结果，但是 RIPA 获得了完全相反的结果

    4、研究方法

    野生型和突变型乳腺上皮细胞通过 RIPA 裂解液裂解，通过离心获取 RIPA 可溶性和不可溶性组份

    RIPA 不可溶性组份用 SDS-PAGE 样品缓冲液溶解，使用多种抗体进行验证

    5、主要发现

    RIPA 不可溶性组份中有明显的蛋白丢失情况

    野生型和突变型样品均有丢失蛋白，包括磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白（pY-416c-Src）

    划重点：在某些蛋白质磷酸化研究中慎用 RIPA

    6、研究方法

    使用 RIPA buffer 提取乳腺癌组织中总蛋白

    RIPA 方法提取丢弃的不可溶性组份通过尿素裂解液再次提取蛋白

    通过质谱分析两部分蛋白质图谱

    7、主要发现

    RIPA buffer 提取后不可溶性组份中含有很多种蛋白

    几乎所有的细胞外基质蛋白都存在于不溶性组分中

    不溶性组分中蛋白质的分子量平均高出 60%

    RIPA 在 4 种乳腺癌样品提取中都产生了明显的蛋白丢失，主要是高分子量蛋白

    划重点：细胞外基质研究时慎用 RIPA

    8、研究方法

    小鼠组织样品分别使用离心管柱法和 RIPA buffer 提取总蛋白

    RIPA 提取后不可溶组份进一步使用离心管柱法进行提取

    提取后的蛋白通过 SDS-PAGE 分离，考染进行对比

    9、主要发现

    RIPA 不可溶组份仍可以提取出蛋白，分子量从小于 20KD 到大于 120KD 范围，证明 RIPA 提蛋白有丢失

    *明显的区域是低分子量蛋白

    蛋白丢失是具有选择性，且不成比例的

    不同的样品间蛋白丢失的图谱是不同的

    划重点：定量，定性蛋白研究慎用 RIPA

    What？看完一脸懵 X 吗？用了这么久的 RIPA 居然有这么多慎用，这也太不靠谱了，那该怎么办？

    如果正在做以上实验研究遇到问题，那么务必要使用不同提取蛋白的方法来验证结果！

原创作者：上海远慕生物科技有限公司