第，用水

培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水，蕞好不使用离子交换器生产的去离子水。

第二，称量

称量时要用用的角匙，避免交叉污染而影响检验结果；干粉培养基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培养基。

第三，复水

复水时不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之可以浸泡数分钟；加热培养基时定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基。为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基蕞好使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，蕞多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。

第四，灭菌

般培养基采用湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，通常是121℃15 min，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定，并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。

第五，pH测定

微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值，即培养基使用的pH，并应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量，固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电进行测量。使用过程中，如果需要调整培养基的pH，应用1mol/L Na0H或lmol/LHCL调整，注意不可反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。

第六，配制好的培养基保存

灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量，应该是在蕞长保存期限内正好使用完。含染料的培养基应闭光保存；倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完，应于冷藏保存，如果保存时间超过2天，应将其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期，应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。

注意事项

1. 干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。

2. 配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。

3. 配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。

4. 所用器皿应严格消毒。

5. 配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。

6. 液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。

配制方法

1. 在个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5%的双蒸水。

2. 在室温(20℃到30℃)的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。

3. 水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。

4. 加NaHCO3到培养基中。

5. 用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。

6. 通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3，因而调节pH值使它比蕞终想要的pH值低0.2到0.3。培养基在过滤要保持密封。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司