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大肠杆菌DH5α化学感受态细胞使用说明书
阅读次数:54 发布时间:2024/1/31 10:49:52
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中文名称:大肠杆菌DH5α化学感受态细胞
英文名称:E.coli DH5α Chemical Competent Cell
产品规格:0.1mL*10

本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。使用pUC19质粒检测,转化效率不低于107,适用于高/效的质粒DNA克隆并能保/证高拷贝质粒的稳定复制。

本菌种来源于Hoffman-Berling 1100菌种。

基因型 表现型
deo R 组成型合成脱氧核糖
end A1 核酸内切酶I缺失
gyr A96 具有萘啶酮酸抗性
hsd R17 限制性酶EcoK缺失
△(lac)U169 lac基因缺失
rec A1 DNA重组活性降低
Rel A1 允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sup E44 抑制琥珀突变突变,为某些噬菌体必需
thi-1 不能自身合成硫氨
φ80(lac ZΔM15) 提供α-互补所需的ω片断

储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。

使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击90,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入800μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,200rpm(小于225rpm)振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。

注意事项:
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm ,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

原创作者:上海远慕生物科技有限公司

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