如何促进细胞贴壁

1. 适度消化细胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。

2. 好用塑料瓶培养，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶，或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以帮助细胞贴附新的培养瓶，细胞不易贴壁，建议加多聚赖氨酸处理。

3. 正确配制消化液或培养液。

4. 使用合适的细胞外基质或贴壁试剂。

5. 复苏新的细胞，DI 一周用20%血清帮助细胞复原。

6. 传代接种一定要铺的均匀，避免细胞抱团生长。

7. 细胞传代24小时之内，不要晃动，以免影响贴壁。

8. 体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜上，因此培养在有胶原的底物上有利于生长。人或小鼠表皮细胞培养，可以用γ射线照射后的3T3细胞为饲养层，另外降低pH、Ca2+含量和温度，均有利于上皮细胞生长。

细胞培育的关键

一、万物的成长离不开水，细胞也是相同的，若要它成长，有必要要用新鲜的双蒸水，不含任何杂质和有离子等成分。

二、PBS（也可用BBS、如：Hanks D-Hanks液装备）-此产品主要用于免疫组化染色时安排或细胞的漂洗。Sciencell的DPBS（SicenCell No.0303）是一种无毒、无渗合物的缓冲液，它不包括Ca2 +, Mg2 和酚红而且经过0.2μm过滤消毒，可用于冲刷细胞而不会造成损害。

三、胰蛋白酶的效果是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的安排或许细胞对胰酶的效果反响不相同，胰酶涣散细胞的活性还与其浓度、温度和效果时刻有关，在PH值为8.0，温度为37度时，胰酶溶液的效果才能qiang。所以使用胰酶时。应当掌握好时刻，浓度和温度。

四、内皮细胞触及多个血管生物学的范畴，是很多科研研究的热门，它不仅能完结血浆和安排液的代谢交流，而且能合成和排泄多种生物活性物质，以确保血管正常的缩短和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，从而坚持血液的正常流动和血管的长时间通畅。

五、 原代细胞冻存很关键 ，由于一不留神就会复苏不活 ，一冻回到解放，DMSO是常用的冻存细胞的试剂，但是由于其具有挥发性，毒性，不好掌控，而导致很多科研者在细胞冻存之后自我感觉冻存没有问题，但是复苏起来却一个活细胞也见不着。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司