技术文献

关于胶回收的一些心得体会
阅读次数:267 发布时间:2021/11/10 9:27:54
分享到:
1、提高胶回收量的技巧
1) 增加电泳时的上样量。
2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
3) 切胶时尽量只切有条带的胶,减小切胶体积:含目的片断很少的胶就不要要了,不然影响回收率。
4) 把切的两块或多块胶融化后,无论多大的体积都用一个管子,转移到同一个柱子上。
5) 溶胶时所加的溶液可多一点,这样更有利于DNA与膜的结合,不过一般不要多余750ul。
6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性(电荷)和疏水性使DNA与柱子结合。因此,若电泳缓冲液的PH偏高,可在溶胶液中加入10ul(PH 5.0,3mol/L的 NaAC);为了使DNA分子更好的拦截在膜上,可以添加30%异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7) 加洗脱液之,将柱子在室温放置几分钟(大约需10分钟),以使乙醇充分挥发。
8) -后少加些洗脱液,尽量减少回收体积,一般用30-50μl洗脱液洗脱(不能太少,否则无法浸湿膜反而不利于洗脱);洗脱液滴在膜中央,以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后,可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱,或用封口膜密封4度过夜,第二天再离心回收,效果不错。
10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱,再次离心。

2、PCR 产物回收的详细方法和步骤
1) 普通胶回收
如果要胶回收,-好还是用试剂盒,方便,回收率也略高,实在要手工回收,可以切胶后加入3倍体积TE,水浴熔化后,酚、酚/氯-仿抽提干净,乙醇沉淀即可。

2) 从低熔点凝胶回收DNA
纯化DNA-片段 加与凝胶体积相等的TE(10mmol/l Tris-HCl pH8.0,0.1mmol/l EDTA ),置65℃水浴5分钟保温,使凝胶完-全溶解。
待放至室温,加等量酚(TE饱和,TE封在上层,取下层酚),轻轻混匀(不用混匀),12000rpm,3分钟离心。反复1-2次。
取上层液,加0.1体积3mol/L醋酸钠(pH5.2)和2.5倍体积无水乙醇,进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解,测定含量,备用(可用于目的基因结构分析,探针制备等)。

3) 扩增特异性好的PCR回收
如果PCR扩增特异性好,只是简单的PCR产物纯化回收,可以在PCR产物中加入50ug/ml 的蛋白酶K,37度1h,酚/氯-仿抽提一次,氯-仿抽提一次,上清加入0.1体积的醋酸钠,2.5体积的无水乙醇沉淀回收。

原创作者:上海远慕生物科技有限公司

产品搜索

请输入要搜索的关键词

联系我们
  • 公司名称:上海远慕生物科技有限公司
  • 公司地址:上海市嘉定区曹安公路5588号
  • 公司电话:021-58999639
  • 公司传真:021-58999639
  • 联系人:俞燕熙
  • 手机:13310162040
  • 网址:www.yuanmubio.com

上海远慕生物科技有限公司:细胞冻存液,氨苄青霉素溶液,人白介素ELISA试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒,显色试剂盒,新生牛血清,标准胎牛血清,牛血清白蛋白溶液,小鼠血浆,鸡红细胞,透明质酸酶溶液,微生物培养基,胰蛋白酶储存液,两性霉素B溶液,LB冷冻缓冲液,ABTS试剂,磷酸酶抑制剂,EB缓冲液,荧光染色试剂盒,肥大细胞染色液,人源基因质粒,胡蔓藤碱乙标准品,番茄红素标准品,Pd-C-II标准品,知母皂苷E标准品,穿刺培养基,puc19质粒,CPD抗凝剂,荧光抗体稀释液
地址:上海市嘉定区曹安公路5588号 电话:021-58999639 传真:021-58999639 技术支持:阿仪网 总访问量:7094176

在线客服
热线电话

02158999639

13310162040

工作时间:8:30-18:00

12

阿仪网推荐收藏该企业网站