标准品是标记免疫分析定量的依据。标准品的正确与否直接影响样品的测定结果。如果在连续测定中，或各实验室之间使用的标准品不一致，则可影响到实验结果的可比性。为此，对标记免疫分析所使用的标准品应满足如下要求。


　一、标准品的要求

1、化学结构：原则上标准品应与被测物具有完/全相同的化学结构，包括相同的立体化学结构。但在实际工作中，用化学结构完/全相同的物质作标准品是十分困难的。这是由于一方面来源有限，另一方面有些被测物本身的化学结构还不清楚，或是有明显的异型性。所以有时也用结构类似的物质作标准品。此时，应充分了解这些物质与真正标准品之间的定量关系。

2、化学纯度：所有通过化学合成法制备的小分子化合物，都应是高化学纯度的纯品。对某些蛋白类物质，则可能由于纯化的方法不同而有差异。对此，在初建立该方法时，应与上公认的标准参考品或高纯度的纯品进行比对。

3、免疫纯度：标记免疫分析是通过比较被测物质与标准品的免疫活性实现的，故被测物质与标准品对所用抗体的免疫活性应该完/全一致，即两者对所用的同一抗体有完/全相同的亲和力。因此，标准品的免疫纯度比其化学纯度更重要。

4、反应介质：免疫学反应受反应介质和温度等条件的影响，所以理论上要求标准品和被测物应在完/全相同的介质中进行反应。如测定血清中某物质的浓度，其所用的标准品也应溶解在无被测物的零值血清中；如测定尿液中某物质的浓度，其所用的标准品也应溶解在无被测物的尿液中等。但在实际工作中这一点很难做到。因为，血清中的成分十分复杂，因而无被测物的零值血清的制备非常困难，而且个体血清中还可能存在一些干扰物质。理想的标准品应该用与被测样品相同的基质(如血清)，先将被测物质完/全去除，然后再加入已知量的被测物质的纯品。

5、干扰物质：标准品中不能有干扰分析的物质。在作为标准品使用，必须对那些从机体提取到的大分子物质活性进行测定。

6、标准品的批量：为保/证检测的连续可比性，每批标准品应有相当大的量，以保/证在较长的时间内使用。每批标准品如保存的条件适当，在相当长的时间内可保持其浓度和免疫活性的稳定。这对于生产标记免疫分析试剂的厂家尤为重要。

　　二、标准品的分

所谓标准品在英语中有三个名词，即标准品 (standard)、校准品(calibrator)和参考品(reference)。这三个名词的意义不完/全相同，但在国内它们则经常被混淆。目在我国的标记免疫分析实践中，所谓的"标准品"实际上是指校准品。为使用方便先仍用"标准品一词"。

有关标准品可分为如下的等：

【参考品(international reference)】：参考品是由WHO指/定的实验室制备，并与有关国家的一定机构联系(在我国是卫生部药品与生物制品检定所)，被公认为/高/别的标准品。到目为止，与标记免疫分析有关的已达数十种。但由于标记免疫分析方法的迅速发展，很多标记免疫分析方法还没有参考品。

【国/家/标准品】：国/家/标准品是由国家的有关权威机构，用高化学纯和高免疫纯、低交叉反应的纯品制备的，供国家内部使用。国/家/标准品应与参考品或其他国家的国/家/标准品进行比对。我国现已有国/家/标准品数种，如胰岛素(insulin)、绒毛膜促性腺素(hCG)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、肝胆酸(CG)、甲胎蛋白(AFP) 等。

【实验室标准】：实验室标准是由实验室自己，或由生产厂家制备的标准品，又称二标准品。所有的二标准品都必须经过与国家标准品或参考品进行比对或校正。如没有参考品或国/家/标准品的，也应与公认的生产厂家的标准品进行比对。

　　三、标准品的制备、鉴定、与计量

1、标准品的制备：标准品的制备是非常复杂的问题，也是标记免疫分析中比较难于制备的一个成分。以下讨论的是实验室标准品(或商品化试剂中标准品)的制备。

（1）基质的制备：如所述，作为标准品的介质(基质)成分应与被测样品相同。对大多数用于测定血清中某物质的标准品，应用不含被测物质的零血清制备，以求反应的介质环境相当。但有时零值血清的制备十分困难，所以有些标准品用适当的缓冲液制备，并在缓冲液中加入一定量的载体蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其与样品的介质环境相近。

零值血清的制备方法有：

A、吸附法：血清中小分子物质如三碘甲状腺原氨酸 (T3)、甲状腺素(T4)等，可用活性炭吸附去除。这种方法简便，但待测物质难以清除干净，而且大分子活性物质不能用此法进行制备。

B、反复冻融法：对大分子活性物质可选用低值血清，经反复冻融使被测物质失活。用这种方法可使某些蛋白类激素大部分失活，但也难以得到真正的零值血清。

C、亲和层析法：用特异性抗体制备亲和层析柱，用以吸附被测抗原。用这种方法可以得到高质量的零值血清，但本法比较复杂而且成本也高。

（2）标准物纯品的选择：应选择高化学纯和高免疫纯的纯品作标准品。其中免疫纯尤为重要，在标准品中不应含有与被测物质有交叉反应的物质。

（3）标准品的制备：先用零值血清配置高浓度的标准品，然后根据实验系统的要求，用零值血清将高值血清稀释至应有的浓度，制成符合预定要求的，由不同浓度组成的系列标准品。

2、标准品的鉴定

（1）免疫活性的鉴定：选用高特异性的抗血清分别作公认标准品(如WHO的参考品或国家标准品)的待鉴定标准品的剂量反应曲线，并观察两条曲线的平行性。如两条剂量反应曲线平行，说明两种物质对同一抗体有相同的亲和力，即二者是同质性物质。如两条剂量反应曲线不平行，说明两种物质具有异质性，因而这一待鉴定的标准品是不能使用的。

（2）浓度的标定：用已鉴定过的，免疫活性合格的标准品，与公认的标准品作浓度相同的剂量反应曲线。此时，两条剂量反应曲线应该是基本重合的。如果两者平行但不重合，则取两条剂量反应曲线的50%结合处的相应剂量( ED50 )计算二者的换算系数，然后调整待鉴定标准品的浓度，直至使两条剂量反应曲线完/全或基本重合为止。

3、标准品的计量：许多小分子抗原或半抗原已能得到纯品或进行合成，它们对作为标准品的要求可以得到基本的满足，其计量多直接用单位体积中的重量表示，如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。近WHO推荐用质量单位取代重量单位，即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。对大分子的活性物质则比较复杂。由于得不到绝对的纯品，故很难直接用单位体积中的重量或单位体积中的质量计量。因此，常用该物质的生物活性单位表示，如IU / L、mIU / L等。

　　四、标准品的稳定性与保存

如所述，为保/证检测的连续可比性，每批标准品应有相当大的量，以保/证能在较长时间内使用。因此，每批标准品应在适当的条件下保存，使其免疫活性和浓度保持稳定。

1、影响标准品稳定的因素

（1）基质中的酶、细菌污染、pH的变化、氧化、潮湿等因素都可以导致标准品的变性，而且这些变化可因高温和光照加速。

（2）在保存过程中发生聚合反应等分子结构的变化，可使标准品失活。

（3）容器内壁的吸附作用和溶剂的蒸发可造成标准品浓度的改变。

（4）保存条件不适当也可以影响标准品的稳定性，如反复的冻融可降低标准品的免疫活性等。

2、标准品的保存方法

（1）冷冻干燥法：冷冻干燥对标准品的浓度和免疫活性无明显的影响，是目常用的保存方法。冷冻干燥制品在低温下，可在较长的时间内保持稳定。但应用冷冻干燥制品时，复溶体积的准确度十分重要。因此，要用经过校准的量器准确的复溶，以减少标准品的浓度误差。

（2）在标准品中加一定量的防腐剂可减少细菌污染的影响。

（3）密闭真空保存或充入惰性气体等方法也可以增加标准品的稳定性。 目常用的方法是：在标准品中加入少量的防腐剂(如0.1%叠氮钠或0.1%硫柳汞)，冷冻干燥后密封，并在低温下保存。但应注意，一旦复溶后应放低温保存，并不得反复冻溶。复溶后的标准品其有效期明显缩短，一般不超过6～8周，有些物质可能更短。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司