伊文思蓝染色液（0.5%）

产品简介： 

    伊文思蓝（Evans Blue）又称偶氮蓝，分子式 C34H24N6Na4O14S4，分子量为 960.80，CAS 号为 314-13-6。伊文思蓝属于一种常用的偶氮染料制剂，因其分子量大小与血浆白蛋白相近， 而且在血液中与血浆白蛋白有很高的亲和力， 因此在神经科学研究中常被用于示踪观察血脑屏障（BBB）的完整性，也用于细胞染色区分活细胞、死细胞，亦可测定血容量。伊文思蓝作临床药物用于测定血浆和血容量， 也可作动脉插管的定位。 正常情况下血浆白蛋白无法透过血脑屏障， 所以染色后如果神经系统血脑屏障完整， 与血浆白蛋白结合的依文思蓝无法使其着色。相反， 如果神经系统血脑屏障被破坏， 依文思蓝就可以进入神经系统并使其着色。在荧光波长 470nm、540nm 处有强峰， 680 nm 处有 弱峰。可以使用化学透析法和比色法进行检测。 

    伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料， 常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。 活

细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。 伊文思蓝染色后，通过显微镜下直接计数

或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量，其中 0.5%为*常用的

浓度。 活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色， 因此可以通过此方法在显微镜下区分死

细胞与活细胞，但无法区分死亡与坏死。 

产品组成： 

自备材料： 

1、 注射器、组织匀浆器 

2、 PBS 

3、 三或丙酮 

操作步骤（仅供参考）： 

（一）血脑屏障通透性 

1、 取处理后的实验动物（以小鼠为例）， 静脉注射 Evans Blue Stain （0.5%）数秒至 1 分钟内，

    小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5～1h 后处死小鼠，取目的脑组织。 

2、 脑组织置于 1.5ml 离心管中，加入 1ml PBS， 迅速 用组织匀浆器将脑组织制成匀浆, 

    1000g 离心 15min。 

3、 取上清，加入等量三，4℃孵育 18～24h。该步骤亦可采用如下操作: 取上清，

    按上清:丙酮=3:7 比例加入丙酮，室温孵育 24h。 

4、 1000g 离心 20～30 min 或 2000g 离心 15min。 

5、 取上述溶液 1～2ml，用分光光度计测620 nm 处吸光值 （OD 值）。同时测定已知不同梯度     的标准依文思蓝的 OD 值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思 

    蓝含量。  
MicrosoftInternetExplorer402DocumentNotSpecified7.8 磅Normal0

（二）活细胞染色 

1、取 100ml 重悬细胞到常规 1.5ml 或 0.5ml 离心管内，入 100ml Evans Blue Stain 轻轻

   混匀，染色 3min（染色时间可适当延长，但不宜超过 10min）。 

2、吸取少量经过染色后的细胞，用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量，

   每个细胞样品至少数 500 个细胞，数出蓝色细胞和细胞总数。细胞存活率计算公式如下: 

   细胞存活率＝（细胞总数－蓝色细胞数）/细胞总数´100% 

注意事项： 

1、 Evans Blue Stain 对人体有轻微毒性，请小心防护。 

2、 细胞染色时，注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。 

3、 血脑屏障通透性实验中， Evans Blue Stain注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。 

4、 采用低温冷冻离心机进行离心。 

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

有效期： 6 月有效。