远慕浅谈：HEPES缓冲液的配制和使用方法

    在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。那么，HEPES缓冲液的配制和使用方法怎样呢？HEPES缓冲液是一种弱势，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。

    HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式： C8H18N2O4S。

    HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/rna提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。

    关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：

    一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

    119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2），然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。

    二、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）

    HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，*后定容。

    三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

    将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖（glucan or dextran）和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。

    HEPES使用方法有两种：

    （1）HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。

    （2）亦可配成 100 x 贮存液（l mol/L），使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，*终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L（100 x）HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶），4℃或-20℃保存。

    需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶，大家根据实际情况正确灵活配制就OK了。