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过滤应该是实验室中非常常见的实验,进入实验室后必须掌握的基础技能。特别是做一些分析型的检测实验,一般都会进行稀释和过滤。然而根据样品量多量少的不同,需要选择不同的过滤装置。
可能很多小伙伴在做实验时,只是按部就班,师兄师姐让怎么做就怎么做,也没有思考太多原因为什么要那样做。那么,今天我们就来系统地说说过滤的一些小妙招,知道这些,兴许还会颠覆你之前的实验,至少还能让实验效率提高一倍呢。那么,先来说说针对小量样品的过滤。
01、一次性针头式过滤器
一次性针头式过滤器与一次性注射器配套使用,可组装成一个简易的过滤装置,适用于液体量小的过滤,量大或者不溶物过多会导致堵塞,主要应用于样品的预滤,实验室生物流体、培养基和媒介添加剂的除菌过滤。
02、millipore 超滤离心管
蛋白浓缩和换 Buffer 通常使用超滤离心管,有多种品牌,但是*常用的要属 Millipore 品牌。Millipore 有多种型号的供选择,选择合适的超滤管,主要视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。
刚做实验的人员肯定会好奇到底选择多大截留分子量比较合适呢?10kDa、5kDa、还是 30kDa?通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的 1/3,比如目的蛋白分子量为 35kDa,就可以选择 10kDa 截留分子量的超滤 管。若目的蛋白分子量为 10kD 左右,则可以用截留分子量 3kD 的超滤管。使用时,需要将超滤离心管放在离心机中,一定要注意质量和重心二者都要达到平衡,且转速不可太快,否则直接损坏超滤膜。超滤管是可重复使用的,使用一次就扔掉确实太浪费;但也不会使用太多次,一般也就用一两次就换新的。
保存时要特别注意,将超滤离心管的超滤膜泡在叠氮钠溶液或 20% 的乙醇溶液中,防止长菌,而且防干,只要超滤膜浸了水,就不可以再让它干,否则超滤膜的分子结构就变了。切记不可以用超声洗涤。
接下来,要讲的是针对大量样品的过滤:一般是滤膜与滤杯配套使用。
03、微孔滤膜
一次性针头式过滤器虽然方便,但是只能过滤少量样品。当需要大量过滤时,可以选择微孔滤膜结合进行滤杯过滤。微孔滤膜主要用于样品分析特别是色谱分析中流动相及样品的过滤,对保护色谱柱及输液泵管路系统和进样阀等不被污染具有良好的作用。
目前已广泛应用在重量分析、微量分析、胶体分离及无菌实验中。与一次性针头式过滤器一样,膜的直径分别有 47、50 mm,其孔径分为 0.22、0.45 μm,同样分为有机系和水系,过滤样品时根据液体的性质对应选择。
04、搅拌式超滤杯
在操作大体积样本时,Millipore 标准的 Amicon Ultra 超滤管(0.5/2/4/15mL)已经明显不能满足需求,这时超滤杯就非常必要了。Amicon 搅拌式超滤杯方便好用,功能非常强大。比代超滤杯设计更加符合人体工程学,组装、拆卸以及开关都极为方便。
配套膜片选择更广,包括超滤膜和微滤膜以及您自选的膜片。可进行温和浓缩、脱盐、换液,更适合大体积病毒、外泌体/囊泡、蛋白溶液等样品,同时,提供操作视频和中文指南,技术支持完备。另外,多种容量可选:50mL,200mL 和 400mL,根据实验需要选择。
05、真空过滤器
一次性真空式过滤器由透明高分子材料聚苯乙烯(GPPS)制成,利用真空泵提供压力差,用于组织培养液和其他实验室流体溶液的大量过滤,样品处理量可达数升,过滤后的样品可直接以无菌的收集瓶保存。4 种上杯的过滤膜类型可选:MCE、尼龙、PVDF 和 PES。膜孔径范围:0.10μm,0.22μm,0.45μm;外置有一个抽真空小孔,可一次性快速过滤大量实验流体。
过滤装置稳定,重心低,可防止样品溅出。易读取标志显示滤过容量。运输过程中,优质防尘塑料密封式袋子单个独立内包装,不易污染。另外,可配有单独的过滤器上杯和收集瓶,以供不同实验要求选用。
06、滤杯
这款滤杯可直接接蓝盖瓶,可反复使用。不需用抽滤瓶,接上真空泵可直接使用。收集瓶带有刻度,滤过液可直接保存于收集瓶。可高压灭菌,重复使用,更经济划算。适用滤膜直径为 47 毫米。使用时,过滤样品无需单独清洗,有机溶液残留会挥发掉,水溶液也会自行蒸发干。
07、多联过滤器
多联过滤器专为多个样品同时过滤而设计制造。目前,国内实验室在对溶液进行过滤时,一般采用玻璃材质砂芯过滤装置,这种方法每次只能过滤一个样品,过滤速度慢,效率低,人工劳动强度大。对于需要同时过滤多个样品的操作者,选择使用多联过滤器更为方便。由于它的每一个过滤架均有独立的控制阀门,因此仅需用一个真空泵便可支持单联或多联同时操作。全不锈钢材质的多联过滤器支架可在 180℃ 的高温下进行过滤操作;铝合金夹子设计合理紧密,可以方便地将滤杯与中间过滤头合在一起并保证严格密封而不会漏液。同时,316L 卫生级不锈钢材质耐酸碱,耐腐蚀,易于高温消毒,使分析结果更加稳定可靠。
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