无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。

(1)恒定的细胞生长温度：37℃.(维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。)

(2)ph ：7.0-7.4 .(过酸或过碱可导致细胞死亡。这主要与蛋白质的变性和细胞膜的结构受损有关。)

(3)渗透压 ：细胞内外可溶于水的物质比例和种类决定细胞的膨胀与收缩程度，因为细胞膜是半透膜，只允许对自己有利的物质通过。同一物质在细胞内外的分布的数量不同，当某一种极溶于水的物质在细胞外浓度过大时，有可能导致细胞干瘪死亡，这些物质在细胞内过多时导致细胞过量吸水膨胀。细胞膜调节渗透压的能力是有限的。

(4)营养物 ：营养物和水一起，又叫细胞培养液，培养液中含有细胞增殖和生长所需要的各种物质。营养物包括：n 源、c源，这些物质与提供能量有关；无机盐、维生素、激素，这些物质与代谢调节控制有关。细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的ph、渗透压、营养物、调节物质的全部需要。

(5)水 ：需要经过灭菌锅灭菌才能放入培养箱水槽

(6)无菌条件 ：与实验室的硬件设备和个人操作有很大关系。

(7)合适的气体环境：气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件，所需气体主要有氧气和二氧化碳。动物细胞需要不断供给氧气和排除二氧化碳，植物细胞与此相反。