胎
牛血清是
细胞培养中常用必备的添加
培养基。它营养丰富,大约含有三四百种不同成分,具有基础培养基所不具备的营养因子。
它给细胞提供的益处主要有六个方面
1>提供细胞生长所需的天然激素或天然的生长因子。
2>提供天然的结合
蛋白,能识别氨基酸、脂质、金属离子和激素等,能结合并调节它们的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并对细胞代谢、生物合成、增殖和存活具有潜在的影响。
又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多个钙离子结合位点,因而能调节和维持血清中的钙离子浓度。
3>天然含有粘附蛋白等细胞外基质成分,促进细胞的附着、铺展。
4>提供解毒功能。这主要通过血清中的某些蛋白与有毒的金属离子结合来完成的。如金属硫蛋白,对多种重金属有高度亲和性,并可清除细胞生长环境中的氧自由基(·O),具有很强的抗氧化活性,可防止细胞衰老。
5>提供酸碱度缓冲的作用,以及维持渗透压。
6>提供蛋白酶抑制剂,使细胞免受蛋白酶的损伤。因此在细胞消化时,常用含血清的培养液终止胰酶对细胞的作用。
由于胎牛血清几乎是通用的生长添加物,适合动物、人和
昆虫细胞等许多类型细胞的培养,因此使用血清不需要为每一类细胞优化培养基,节省了大量时间和精力。
血清保存注意事项:
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
(2)热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室温,待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。
(4)一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
(5)血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。
(6)切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会破会而影响血清质量。