细菌细胞壁很薄，革兰氏阳性菌的细胞壁为20~30nm，革兰氏阴性菌的细胞壁为10~13nm。组成细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖，它与染料结合的能力差，不易着色，在细菌的染色过程中，一般情况染料都是通过细胞壁的渗透、扩散等作用而进入细胞，细胞壁本身并未染色。

实验方法原理： 根据细菌细胞在高渗溶液中或用乙醚蒸气处理后，会产生质壁分离这一现象，经染色后也可在普通光学显微镜下区分细胞壁和细胞质膜。

实验材料 ：巨大芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌

试剂、试剂盒：结晶紫水溶液 单宁酸（鞣酸）水溶液 磷钼酸水溶液 甲基绿水溶液 NaCl 结晶紫水溶液 Bouin氏固定液 硫堇水溶液 乙醚

仪器、耗材： 乙-醚蒸气瓶

实验步骤：

1.  单宁酸法

（1）将培养16~18小时的巨大芽孢杆菌按常法制成涂片。

（2）用5%单宁酸染5分钟后，水洗。

（3）用0.2%结晶紫染3~5分钟，水洗，吹干。用油镜观察，细胞壁呈紫色，细胞质呈淡紫色。

2.  磷钼酸法

（1）制备浓厚的涂片，在未干时浸入1%磷钼酸水溶液3~5分钟。

（2）用1%甲基绿水溶液染3~5分钟。

（3）水洗后，吹干，用油镜观察。细胞壁为绿色，细胞质无色。

3.  区分细胞壁与细胞质膜

（1）乙醚蒸气法

①将巨大芽孢杆菌涂布于盖玻片上，翻转盖玻片使其放在乙醚蒸气瓶的瓶口上蒸3分钟。

②取下盖玻片置Bouin氏固定液中30分钟后取出，水洗。

③用硫堇染色30秒钟。

④水洗，水封，置油镜下观察。

（2）NaCl法

①取一滴25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。

②挑一小环培养6小时的枯草芽孢杆菌，在25%NaCl水滴中涂布均匀，待自然干燥。

③滴加0.01%结晶紫于其上，使盖满有菌部分，30秒钟后水洗，干燥，用油镜观察结果。