细胞培养对无菌环境的要求较为严格。微生物污染通常是造成细胞培养失败的主要原因，细胞间的杀菌主要涉及空气的杀菌，其常见方法如下。

紫外线消毒:

紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性 菌为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力强。紫外线的直 接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活， 间接作用是通过紫外线 照射产生的臭氧杀死微生物。直接照射培养室消毒，用法简单，效果好。 紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关， 辐射强度随灯距离 增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射 时间要适合。离地面 2 米的 30W 灯可照射 9 平方米房间，每天照射 2－3 小时， 期间可间隔 30 分钟。灯管离地面 2 米以外要延长照射时间，2.5 米照射效果较 差。紫外灯照射工作台的距离不应超过 1.5 米，照射时间 30 分钟为宜。由于上述各种情况的不确定性，导致紫外线杀菌效果不是很理想，一般需要过夜杀菌。此外紫外线对人体有伤害作用，紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害，且对培养细胞与试剂等也产生不良影响，因此不要在紫外线灯照射下进行操作。

甲醛熏蒸

甲醛是一种高效能化学灭菌剂。不易燃、不爆炸、不腐蚀金属。它能与蛋白质中的氨基酸结合而使蛋白变性，使酶的活性消失。故有强大的杀菌作用。一般称作为“大消”，用来对细胞间进行彻底的消毒杀菌。但是甲醛是一种对人体有害的物质，并且细胞培养实验室一般空气流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要紧急使用的话，在甲醛灭菌完后，可以用等量的氨水中和空气中的甲醛。

空气过滤

过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗 粒阻留，从而达到除菌目的。在体外培养时，过滤除菌大多用于遇热容易变性而失效的试剂或培养液。目，大多实验室采用微孔滤膜滤器除菌。关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。