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远慕技术:质粒纯度不高怎么办?
阅读次数:446 发布时间:2022/3/21 11:41:03
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1.混有蛋白:不要使用过多菌体。经溶液P1、P2、P3处理,离心后溶液应为澄清的,如果还混有微小蛋白悬浮物可再次离心去除后再进行下一步骤。

2. 混有RNA:RNaseA处理不彻底,请减少菌体用量或加入溶液P3之后室温放置一段时间。如果溶液P1已保存6个月以上,请在溶液P1中添加RNaseA。

3. 混有基因组DNA:加入溶液P2和P3后应温和混匀,如果剧烈振荡,可能把基因组DNA剪切成碎片从而混杂在质粒中。如果加入溶液P2后过于粘稠,无法温和混匀,请减少菌体用量。细菌培养时间过长会导致细胞和DNA的降解,培养时间不要超过16小时。

4. P3溶液加入时间过长:P3溶液加入后,放置时间不要太长,否则有可能会产生小片段DNA污染。

5. 含大量核酸酶的宿主菌:宿主菌含大量核酸酶,在质粒提取过程中降解质粒DNA,影响提取质粒DNA的完整性,好选用不含核酸酶的大肠杆菌宿主菌,如DH5α和Top10。

6. 质粒的二聚体和多聚体形式:质粒复制过程中形成的,与宿主菌相关,电泳可检测出多条条带,单酶切处理后可变成单一条带。

处理提示:

1、购买后,请务必确认标签上的注意事项。

2、做好预防颠倒,摔坏的措施和管理体制。

3、在使用再次确认标签上的注意事项。做好必要的安全对策。

4、对没有标明其危险特性,有害特性的,也要慎重地进行操作。

5、必须戴好防护用具,小心翼翼进行操作。

6、请参照相关法规,文献,MSDS等信息,理解并掌握好试剂的特性,再进行安全操作。

7、通常购买试剂时要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话,要更加注意其保管和管理。

8、万一试剂操作者并非业技术人员。必须在业人士的指导监督下进行操作。

9、对于使用后的废弃物,不要或旧的试剂,应按照相关法律法规正当处理。

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