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重点分析:实验试剂应用的常见问题
阅读次数:379 发布时间:2022/6/2 12:45:46
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   1. 测定范围
 
  每种待测物都有一个可测定的浓度或活性范围,样品结果若超过此范围,分析仪将显示结果超过范围的提示。表示试剂已经变质,应更换合格试剂。
 
  2. 底物耗尽
 
  使用连续监测法、两点法测定酶活性时,若酶活性非常高,底物接近被耗尽,吸光度上升或下降会超过某一吸光度变化范围,监测期的吸光度将偏离线性,使测定结果不可靠。
 
  3. 试剂空白
 
  每种试剂都有一定的空白吸光度范围,试剂空白吸光度的改变往往提示该试剂的变质。而试剂空白吸光度限值,常作为程序参数输入仪器,如经核查超限,仪器会自动报警,提示更换试剂。需要指出的是,还原型辅酶I (或II)等投料量不足或劣质的原料,往往需要加大用量,才使“表观”吸光度上升,凑合过试剂空白核对的“关”,其后果为如下情况:
 
  ① 线性范围变窄现象:高值测不高。可能因为:a.生产试剂时有效成分投料量不足;b.试剂成份稳定性较差。
 
  ② 灵敏度变低现象:酶促反应速度曲线斜率下降,测定结果有严重系统误差。可能因为试剂底物浓度不足。
 
  ③ 低值偏高现象:试剂空白的变化曲线(吸光度VS时间)明显波动。可能因为试剂自身不稳定,自行分解;工具酶纯度不够,杂酶含量超限,导致干扰作用。
 
  4. 样品信息
 
  样品的溶血、脂血、黄疸等会对测定结果产生非化学反应的干扰。因此,应根据溶血、脂浊、黄疸的光谱吸收特性,采用双波长或多波长的检测模式,并在结果计算中扣除因溶血、脂血、黄疸引起的影响,减少干扰程度。
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