染色缓冲液（BSA）的配制：

PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱备用。

准备单细胞悬液：淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。

用冰染色缓冲液洗细胞2次，离心细胞，用冰染色缓冲液重悬细胞，使终浓度为2×107细胞/ml。

各取50ul（106细胞）细胞悬液到2个圆底的Ep管中。

根据抗体说明书在其中1个Ep管中加入合适的抗体量，另外1个加入同型对照抗体，冰上避光孵育20分钟（建议每5分钟轻轻混匀，以免细胞沉积）。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。

用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体，300×g离心5分钟，每次离心后小心吸取上清。

用适量染色缓冲液（如500ul）重悬细胞。

流式细胞仪分析染色结果（不超过4小时）。如果暂时无法检测，也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后，避光储存在4度。固定后的细胞可以保存zui多一个星期。

抗体规律：

（1）初次反应产生抗体：当抗原次进入机体时，需经一定的潜伏期才能产生抗体，且抗体产生的量也不多，在体内维持的时间也较短。

（2）再次反应产生抗体：当相同抗原第二次进入机体后，开始时，由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合，可使原有抗体量略为降低。随后，抗体效价迅速大量增加，可比初次反应产生的多几倍到几十倍，在体内留存的时间亦较长。

（3）回忆反应产生抗体：由抗原刺激机体产生的抗体，经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原，可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同，则称为特异性回忆反应；若与初次反应不同，则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的，短时间内即很快下降。