培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净，称取的份量务必准确。酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6，呈弱碱性。

营养均衡：六大营养物缺一不可。部分生物还有特殊的要求；营养物质的配比；酸碱度。培养基配制时的质量控制

容器：配制和分装培养基的烧瓶，平皿或试管等器材应为中性，无酸，碱抑制物残留，平皿底部要平，以免琼脂厚薄不一，影响药敏试验结果。

成分来源：各种成分来源可靠，不含对目的菌生长有抑制的物质。特殊要o/f试验），除加入葡萄糖外，不能含o/f试验的假阳性。培养基配制用水应是蒸馏水。

pH值调整：根据培养基的不同要求调整pH 值，控制在要求范围的±0.2之内。应当注意，培养基在高压灭菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矫正时应比实pH值高0.1～0.2。

灭菌：根据培养基所含成分及配制数量的不同，选择不同的灭菌方式，既要达到灭菌效果，又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养基，如mh琼脂、营养琼脂可用高压灭菌，即121℃15min ；而含糖的培养基则以108℃灭菌为好，以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血清、牛乳等，可采用间隙灭菌法灭菌。

分装：根据使用的目的和要求决定分装量。分装培养基所用的平皿、试管要求清洁，不残留酸碱；制备平板培养基时，操作台要水平，以避免琼脂平板厚薄不一，同时确保无菌操作。

培养基配制后的质量控制

培养基外观情况：包括颜色、透明度、有无沉淀和凝固。如发现培养基表面有裂纹或与培养皿的边缘分离，说明培养基有脱水现象，必须丢弃。

无菌试验：每一批配好的培养基均须进行无菌试验。先灭菌后分装的培养基，可采用抽样方法试验，少于 100 个样本通常选取 5%～10%的量，如果配制大量培养基，则任意选取 10 个培养基；无菌分装培养基则需全部做无菌试验。样本在 35 ℃ 或其他适宜的温度下隔夜培养，如培养基含有血液，则需再置于室温 1 天，以检查嗜冷菌。选择性培养基因含有抑制物质，能抑制许多微生物，因此，可加入 10 倍量的无菌液体培养基，稀释抑制物质，以利于检出污染菌。即使做过无菌试验，接种时，也要检查每个平板上的可见菌落。

性能测试：每一批新制或新购的培养基，使用均须取已知性质的库存菌种进行性能测试。培养基按目的不同可分为增菌培养基、分离培养基和鉴定培养基。

①增菌培养基：接种少量难以生长的细菌，在一定时间内观察增菌情况，细菌能生长的小接种浓度越小，说明增菌培养基性能愈好。

②分离培养基：要求目的菌生长良好，非目的菌被抑制。一般要求生长的目的菌接种量不可过多，较好的方法是将测试菌调成 0.5 麦氏浊度的菌悬液，再用 0.001ml 的标准接种环涂划在培养基上，观察菌落生长。

③鉴定培养基：应选择具有典型特征的菌株作性能试验。如三糖铁琼脂，须用弗劳地枸橼酸杆菌、福氏志贺菌及铜绿假单胞菌 3 种菌分别接种 3 支培养基，若反应结果为斜面产酸/高层产酸、硫化氢阳性，斜面产碱/高层产酸，斜面产碱/高层产碱，质量才算合格。