免疫组织化学染色是一项广泛应用于肿瘤病理诊断和神经解剖学的技术，一些生物公司提供的免疫组化染色服务可以把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的显像和放大作用，在组织、细胞甚至亚细胞水平检测各种抗原物质。免疫组化染色方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点，在病理诊断和病理研究域都起着十分重要的作用。免疫组化染色质量受到多方面因素的影响，抗原修复是其影响因素，常见的抗原修复技术方法有高压修复法和微波加热修复法。

在染色过程中，用甲醛固定后，在石蜡包埋过程中会使抗原性物质或由于形成醛、羧甲基等原因而被封闭了部分抗原决定簇，或由于甲醛固定和石蜡包埋后部分抗原决定簇与核酸或其他蛋白发生交联，形成网络。固定液中的醛基在使蛋白质变性的同时，自身也会交联形成网络结构，使组织抗原决定簇封闭，从而影响免疫组织化学结果。为解决这些问题就需要做抗原修复。而抗原修复技术的应用，大大提高了免疫组化的染色效果。正确应用抗原修复技术在免疫组化染色中具有重要的作用。远慕生物提供免疫组化染色服务。

1、高压抗原修复法

柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法是一种常见的高压修复法，适合于大量中性福尔马林固定、石蜡包埋组织切片的抗原修复，其效果优于微波修复法和直接煮沸修复法，使得免疫组化结果更加可靠。仪器设备为市售不锈钢家用压力锅，大小尺寸可根据需要而定(内径18cm为好)；1000-1500W电炉一台；不锈钢或耐高温塑料切片架。所需试剂为0.01M柠檬酸型缓冲液，pH=6.0±0.14.

操作步骤：

（1）常规组织切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后，浸泡于蒸馏水中待用。

（2）取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液(800-1500ml)于压力锅中，大火加热直至沸腾；将脱蜡水化后的组织切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，从喷汽开始计时，1-2分钟后，压力锅离开热源，冷却至室温(稍冷后，可在自来水笼头下加速冷却)，取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS(pH=7.2-7.4)冲洗两次，每次3分钟(2×3＇)。

(3)按有关试剂盒的操作步骤执行。

注意事项：

(1)加热时间长短的控制很重要，从组织切片放入缓冲液到高压锅离开火源的总时间控制在5-8分钟为好，时间过长可能会使染色背景加深。

(2)必须使用不锈钢或耐高温塑料切片架，不能使用铜架，以防缓冲液pH值增高而导致掉片。(3)高压锅离开火源后必须等缓冲液冷切后，才能把切片取出。

(4)为防止组织脱落，玻片必须经清洁处理后，涂覆Poly-L-Lysine。

(5)缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。

2、高压修复和微波加热修复之比较

研究者研究了不同抗原修复方法对食管癌中免疫组化染色结果的影响。方法是选取Ki67、IL17、CD4和CD8四种分别定位于细胞核、细胞浆与细胞膜的不同抗原做为免疫组化染色的标记，在食管癌连续切片上应用高压抗原修复和微波抗原修复进行比较分析。结果发现抗原高压修复的染色效果要优于微波修复。一方面，CD4抗原高压修复染色的阳性率要高于微波修复染色的阳性率；另一方面，CD8、Ki-67和IL-17高压修复染色的阳性率与微波修复染色的阳性率无显著性差异。因此在组织不易脱片的情况下，优先考虑使用抗原高压修复；在微波修复与高压修复染色阳性率没有显著性差异的情况下，应该尽可能选择微波修复这种较柔和的方法以避免组织脱片。

抗原修复影响着免疫组化的染色质量，不同抗原修复方法影响着实验结果的表达，目高压加热法是较为广泛的一种方法，此法不但可修复变性的抗原，同时还可使组织通透性提高，从而获得良好的染色效果，但是在操作过程中应特别注意抗原修复液、加热的温度和修复时间的选择。在实际工作中，并非所有的抗原都要进行抗原修复，抗原性保存良好或基本保存者不需要修复，同时应根据抗原种类予以选择修复方法，必要时可多种复原方法同时使用，以其获得更理想的结果。