核酸染料是一种灵敏、稳定和相对安全的荧光核酸染色试剂,是生物实验中不可或缺的一分子,尤其是在核酸检测相关试验中,所以核酸染料对于分子生物学相关业的学生来说并不陌生,该如何选择适合自己使用的核酸染料呢?以下从几个方面来说明:
1、安全性:如果选择EB替代染料,那么染料的安全性就是一个非常重要的指标。安全性评估主要的检测有Ames测试、细胞渗透性实验、染色体畸变和正向突变分析、口服毒性分析等。在安全性方面,具有较多检测项目和机构出具检测报告的核酸染料,安全性可能会更高;另外在一些报道或对比数据中,我们也可根据它们可能的原料来判断它们的安全性。
2、 稳定性:核酸染料的稳定性和在各种条件下的染色效果,会直接影响观察到的染色结果。
3、灵敏度:几乎所有的EB替代染料都其染料的灵敏度至少不低于EB,甚至高于EB,具体到试验内容上,只要不是有特殊的需求,一般都能满足。
4、迁移率:由于核酸染料终都会结合到DNA上,才能通过染料从而对DNA进行分析,这也就意味着如果采用点染法或胶染法进行核酸检测时,根据使用的染料不同,核酸染料或多或少会对核酸的迁移率甚至带型产生影响。
核酸染料说明书产品介绍:
GoldView 是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型DNA染料,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光。通过小鼠皮下注射实验,尚未发现GoldView有致癌作用;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂,因此用GoldView代替EB不失为一种明智的选择。
● 储存条件:
室温贮存一年。
● 实验操作步骤:
100ml溶胶液在微波炉中融化,冷却至60℃左右(不烫手)后加入10μl GoldView,轻轻摇匀后到胶,待胶完全凝固后上样电泳,电泳完毕在紫光灯下观察。
● 注意事项:
1. 胶厚度不要超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。
2. GoldView在pH 3.6-7.0之间能更好地与核酸结合,因此电泳时好使用新鲜的电泳缓冲液。
3. 由于GoldView染色后DNA产生绿色荧光,因此不适于用一般单色胶卷拍照,可以使用凝胶成像系统保存图象。
4. GoldView特别适合于大片段DNA的检测(大于1kb的片段,检测灵敏度与EB相当);当DNA片段小于1kb时,检测灵敏度低于EB,特别是低于500bp的片段,GoldView可能亮度很弱或检测不到。
5. 虽然尚未发现GoldView有致癌作用,但由于GoldView溶液酸性较强,因此对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴手套。