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过氧化物酶(POX)染色实验方法
阅读次数:373 发布时间:2023/4/24 10:49:23
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实验原理

血细胞中的过氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解试剂中的底物H2O2,释出新生态氧,使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺,后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒,沉着于细胞质中。

实验方法

材料:

1.1%TMB

2.亚硝基铁氰化钠饱和溶液

3.1%过氧化氢溶液

4.稀过氧化氢溶液

5.瑞氏染色液

6.新鲜涂片(骨髓或者血片)、染色架、显微镜等

方法:

1.取0.1%TMB乙醇溶液lml,加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10?l,溶液呈淡棕黄色。

2.在新鲜干燥的血片上,加混合溶液0.5ml,放置lmin后,再加稀过氧化氢溶液0.7ml,染色6min。

3.自来水冲洗,待干,瑞氏染液复染15~20min。

4.自来水冲洗,待干,油镜镜检。

实验结果计算

细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。

(-)无颗粒沉着;

(±)颗粒细小,分布稀疏;

(+)颗粒较粗,局灶分布;

(++)颗粒粗大,分布较密,占胞质1/2~2/3;

(+++)颗粒粗大,呈团块分布,几乎布满胞质;

(++++)全部胞质均布满颗粒,可覆盖胞核。

注意事项

1.血涂片和骨髓片应该新鲜制作,涂片应该厚薄适宜;

2.TMB配置在85%~88%的乙醇溶液中效果较好,勿用90%~95%乙醇,否则细胞表面蛋白质很快凝固,妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差;

3.H2O2需新鲜配置,其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见颗粒,红细胞呈棕色或者绿色,即表示H2O2过浓。若H2O2加于玻片上无气泡,则表示无效;

4.染色液pH为5.5;

5.试剂应置于低温暗处,防止应光线照射而失效。
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