大肠杆菌菌株的分型与区别介绍
阅读次数:434 发布时间:2023/5/17 10:45:59
1:DH5a菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1
2:BL21(DE3)菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F-,ompT,hsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3)
3:BL21(DE3)pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F-,ompThsdS(rBB-mB-),gal,dcm(DE3,pLysS,Camr
4:JM109菌株
该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’
5:0菌株
该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC),φ80,lacZΔM15,△lacⅩ74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rps,(Strr)endA1,nupG
6:HB101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1M110或SCS110
大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI,BclI等。而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:
(1)选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;
(2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coliJM110和链霉菌等,者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。