组织固定固定液的选择标准
阅读次数:463 发布时间:2023/11/17 11:04:36
影响标本固定的因素很多,如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等;除此之外,固定液本身也很重要,若所选固定液不当,细胞内蛋白质、脂类、核 酸等成 分将会有不同程度地损失。固定剂好随配随用,并注意其浓度和酸碱度。因此根据实际工作的目的,选用合适的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方 法及适用范围。
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲 醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
甲醛(40%) 100 ml
无水磷酸氢二钠 6.5 g
磷酸二氢钠 4.0g
蒸馏水 900 ml
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多聚甲醛:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
甲醛(40%) 100 ml
95%乙醇 900 ml
(2)B5(醋酸钠一升gong一甲醛)固定液:多用于固定淋巴组织。染色应进行脱gong沉淀处理。
无水醋酸钠 1.25 g
升gong 6.0 g
蒸馏水 90 ml
使用加入甲醛 10 ml
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
饱和ku味酸水溶液(约1.22%) 75 ml
甲醛 25 ml
冰cu酸 5 ml
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
无水乙醇 60 ml
lv仿 30 ml
冰cu酸 10 ml
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理gong。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效。
升gong 5.0 g
重铬suan钾 2.5 g
硫酸钠 1.0g
蒸馏水(加至) 100 ml