1.琼脂培养基的融化

将培养基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高压锅中的蒸汽)融化。经过高压灭菌的培养基尽量减少重新加热的时间,避免过度加热。培养基融化后立即移开,室温静置片刻(约2min），以免玻璃容器发生破裂。

融化后的培养基放入47℃~50℃恒温水浴锅中保温，冷却到47℃~50℃所需的时间取决于培养基的类型、体积和在水锅里的分装量。融化后内培养基应尽快使用，放置时间一般不超过4h。剩余的培养基固后不得再次融化使用。特别是灵敏性培养基，应根据相关标准，缩短融化后放置的时间。

将琼脂培养基倒入类似检测培养使用的独立容器中,插入温度计,记录并保存琼脂的融化温度。

加入样品的培养基应将温度调节到44℃~47℃，或按照相关标准调节温度。

2.培养基的脱气

必要时，在使用将养基放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min,加热时松开容器盖子；加热后盖紧盖子，并迅速冷却至使用温度。

3.添加成分的加入

对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃~50℃时加入,灭菌的添加成分加入应冷却至室温,避免冷的液体会造成琼脂凝胶或形成片状物。将添加成分慢加入培养基并充分混匀，尽快分装到待用的容器中。

4.培养基的弃置

所有污染和未使用的培养基的弃置应采用安全的方式,并符合相关法律法规的规定。