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细胞培养基的除菌方式及注意事项
阅读次数:404 发布时间:2024/2/29 10:24:04
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  细胞培养基灭菌的方式分为高压灭菌和膜过滤除菌,不同的培养基由于其营养成份不同,灭菌方式也可能不同。

某些培养基(如MEM)可进行高压灭菌,这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠,一般是在培养基高压灭菌后才加入。另外可用耐高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15 psi,15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的小损失,不需将灭菌时间延长。

绝大多数细胞培养基不适宜高压灭菌。因培养液中常含有维生素、蛋白质、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用过滤消毒以除去细菌。可供过滤灭菌使用的滤膜很多,其材料多为polyethersulphone(PES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。膜过滤除菌是当较为常用及便捷的一种方法,常采用0.2 μm孔径的滤膜,部份采用0.1 μm孔径。与高压过滤方式相比,滤膜具有使用期限且价格较高,但对细胞培养基的营养成份破坏性较小。

细胞培养基存储注意事项

通常液体细胞培养基避免-20 ℃冻存,因为解冻时可能会有营养成份析出,影响培养效果。正常情况下于2 ~ 8 ℃避光保存,使用从冰箱取出,放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存,其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解,如果细胞生长不良,可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期,对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后,也应低温(2 ~ 8 ℃)贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外,培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。
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