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HRP快速标记试剂盒

点击次数:164  发布时间:2024/3/22

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公司名称:上海远慕生物科技有限公司 型 号: 生产地址:中国大陆 已获点击:164 简单介绍: HRP快速标记试剂盒,高碘酸钠氧化法活化辣根过氧化物酶(HRP)的糖基,经过活化的HRP带有醛基可以与待标记物的游离氨基结合,发生希夫碱反应(Schiff´s base reaction)。本试剂盒适用于带有游离氨基的物质的标记,比如:带有游离氨基(伯胺)的抗体、蛋白或者小分子化合物。本试剂盒采用特有稳定技术,活化HRP保存在液体中,吸取方便,少量可以标记100ug,让您的标记工作更易把控和操作!
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产品货号:CR2626-0.5MGX2支/1MGX5支

 

产品名称:HRP快速标记试剂盒(少量可标记0.1mg)

 

原理与应用酸钠氧化法活化辣根过氧化物酶(HRP)的糖基,经过活化的HRP带有醛基可以与待标记物的游离氨基结合,发生希夫碱反应(Schiff's base reaction)。本试剂盒适用于带有游离氨基的物质的标记,比如:带有游离氨基(伯胺)的抗体、蛋白或者小分子化合物本试剂盒采用特有稳定技术,活化HRP保存在液体中,吸取方便,少量可以标记100ug,让您的标记工作更易把控和操作!

 

试剂盒组成:

 

预活化HRP

 

1mg(50UL液体/支)

 

5mg(250UL液体/支)

标记启动液   

0.5ml

2ml

 

反应终止液干粉      

 

2管(每管可配1ml)

5管(每管可配1ml)

 

标记物保存液

 

1.5ml

6ml

 

备用透析袋(MD6,截留量12KD)

 

4X4CM

10X5CM

 

说明书

 

1份

 

操作步骤

 

1.  先去除待标记抗体或蛋白中的叠氮钠、以及含有氨基的缓冲成分物质,比如甘氨酸、Tris 等还有EDTA等物质可采用透析和超滤的办法置换缓冲液,以去除干扰物质达到好的标记效果!透析或超滤缓冲液选0.01M CB,PH:9.6缓冲液(说明书附件有经验配方无需调整PH),若实验室没有碳酸盐试剂再采用0.01M PBS(PH:7.0-7.4均可)透析或超滤置换缓冲液,调整抗体或蛋白的浓度到2MG/ML。如果抗体和蛋白不含上述这些干扰物质可以直接用上述PBS或CB缓冲液调整浓度到2MG/ML备用。

 

2.  4℃取出HRP标记试剂盒,使各组分充分混匀

 

3. 500ul抗体或蛋白(约1mg)加入50ul预活化HRP(1mg)液体中,用移液枪反复吹打几次混匀混匀后加入HRP标记启动液99ul(加入启动液量依据:每10ul蛋白和HRP混合液加1.8ul启动液)继续混匀数次,避免产生气泡然后避光30-37温箱偶联反应2-3小时若遇快要下班也可放4反应24小时左右(此法效果一样或者更好不必担心)。

 

4. 偶联结束将反应终止粉管中加入1mL去离子水混匀,取50ul加入3所述反应液中(加入终止液量依据:每1mg HRP加入终止液50ul),充分混匀,室温放置1 小时或者4 2小时。

 

5. 终止完成后,可直接加入等体积的标记物保存液充分混匀,置于-20℃保存如果想更上长期的保存建议先用0.067M PBS  PH:7.0(说明书附件有经验配方)透析或超滤置换缓冲液后再加标记物保存液。这样可以保存3年左右甚至更长。



产品功能
抗体的主要功能是与抗原(包括外来的和自身的)相结合,从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物,抗体(antibody)是一种应答抗原产生的、可与抗原特异性结合的蛋白质。每种抗体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活,也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害,如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生,对人体可造成危害。


操作流程:
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.6 碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。
加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔 中,置37℃孵育1小时,洗涤。
同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml, 37℃孵育30-60分钟,洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

原创作者:上海远慕生物科技有限公司


标签:HRP快速标记试剂盒   
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