猪繁殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株和高致病性变异株双重荧光RT-PCR检测试剂盒

详细内容

通用名称：猪繁殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株和高致病性变异株双重荧光RT-PCR检测试剂盒

【包装规格】  50头份/盒

【预期用途】
本试剂盒适用于检测猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株(PRRSV-C)，用于猪繁殖与呼吸综合症病毒美洲型经典株(PRRSV-C)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。本产品不提供活体样品做阳性对照，仅提供人工合成的特异性DNA////段标准品作为阳性对照，仅限于业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗用途。

【储存、有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于7次，有效期12个月。

【技术原理】
采用RT-PCR-LFD技术，结合特异性扩增引物对目的基因进行体外扩增，利用侧流层析试纸条(LFD)技术对RT-PCR扩增产物进行检测，根据一次性核酸胶体金试纸条检测线(T)的结果，判断待检样品中是否含有目的基因，实现检测结果的定性分析。本试剂盒具有灵敏性高、特异性强、反应时间短等优点，操作简便，价格低等特点。

【使用方法】

一、试剂准备（在试剂准备区进行）

1. 取出包装盒中的各组分，室温放置，待其完全融化，混匀后备用。

2. 根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量，按下表1单反应体系配制方法，取相应量的试剂，充分混匀成PCR-Mix，按照20 μL/反应分装到PCR反应管中，瞬时离心后备用。

表1：单反应体系配制方法

二、样本准备（在样本准备区进行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取试剂盒，参照说明书进行操作，提取好的核酸样本如不能立即检测，建议-70℃以下保存。

2. 取出样本后混匀，将阴性对照、待测样本、阳性对照各5 μL加入到PCR反应管中混匀。

3. 盖上管盖，2000 rpm离心30。

4. 将PCR反应管转移到扩增区进行上机。

三、PCR（在核酸扩增区进行）

1. 将上述PCR反应管按照实验布局依次放入PCR仪对应检测孔内，并记录顺序。

2. 按表2设置PCR扩增循环参数。

表2：PCR扩增相关参数

【结果分析】

表3：结果分析表

【注意事项】

1. 使用本试剂盒的实验室，应严格按照国家有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理。

2. 各区域物品均为用，不得交叉使用，以免污染。检测结束后，应立即对工作台进行清洁消毒。

3. 吸取反应液时，应尽量避免产生气泡。上机，应注意检查各反应管是否盖紧，以免液体蒸发造成结果不准确。

4. 检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有10%次氯酸的废液缸内，检测结束的PCR反应管，切忌开盖，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。

5. 工作台及各种实验用品应定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒。

6. 试剂使用应在常温下充分融化并混匀。不同批号的试剂请勿混用，并在有效期内使用。

【储存条件与有效期】

试剂盒应置于-20℃冷冻避光贮存；

试剂盒保存有效期为12个月；

试剂盒反复冻融次数不宜超过5次。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司

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