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禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒

点击次数:0  发布时间:2024/11/18

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公司名称:上海远慕生物科技有限公司 型 号: 生产地址:中国大陆 已获点击:0 简单介绍: 禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒,本产品仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。
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通用名称:禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒
【包装规格】  50头份/盒
【预期用途】本试剂盒采用探针法实时荧光RT-PCR技术,用于检测禽类全血、咽喉拭子、泄殖腔拭子、尿囊液等样本中的H5/H7/H9亚型禽流感病毒(AIV-H5/H7/H9),检测结果可用于AIV-H5/H7/H9感染的辅助诊断。

【主要组成成份】

试剂名称

规格与装量

AIV-H5/H7/H9反应液q

950 μL/×1

AIV-H5/H7/H9混合酶q

50 μL/×1

AIV-H5/H7/H9阳性对照q

100 μL/×1

AIV-H5/H7/H9阴性对照q

100 μL/×1

 

 

【使用方法】

一、试剂准备(在试剂准备区进行)

1. 取出包装盒中的各组分,室温放置,待其完全融化,混匀后备用。

2. 根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量,按下表1单反应体系配制方法,取相应量的试剂,充分混匀成PCR-Mix,按照20 μL/反应分装到PCR反应管中,瞬时离心后备用。

表1:单反应体系配制方法

试剂

反应液

混合酶

用量

19 μL

1 μL

二、样本准备(在样本准备区进行)

1. 使用商品化的病毒核酸提取试剂盒,参照说明书进行操作,提取好的核酸样本如不能立即检测,建议-70℃以下保存。

2. 取出样本后混匀,将阴性对照、待测样本、阳性对照各5 μL加入到PCR反应管中混匀。

3. 盖上管盖,2000 rpm离心30

4. 将PCR反应管转移到扩增区进行上机。

三、PCR(在核酸扩增区进行)

1. 将上述PCR反应管按照实验布局依次放入PCR仪对应检测孔内,并记录顺序。

2. 按表2设置PCR扩增循环参数。

表2:PCR扩增相关参数

体系

反应体系设为25 μL

信号采集

选择FAM通道检测H5亚型;

选择CY5通道检测H7亚型;

选择ROX通道检测H9亚型。

PCR

反应

条件

阶段

条件

循环数

逆转录

50℃:30 min

1

预变性

95℃:5 min

1

PCR

95℃:15 sec

45

60℃:30 sec

(此阶段结束时采集荧光信号)

 

【结果分析】

表3:结果分析表

实验成立

条件

阴性对照

三通道Ct>38或者No Ct,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

阳性对照

三通道Ct≤30且出现典型的S型扩增曲线。

样本结果

判定标准

H5亚型

阳性

FAM通道Ct≤35且出现典型的S型扩增曲线。

H7亚型

阳性

CY5通道Ct≤35且出现典型的S型扩增曲线。

H9亚型

阳性

ROX通道Ct≤35且出现典型的S型扩增曲线。

 

结果可疑

任一通道35<Ct≤38,建议复测,复测结果仍为可疑,且出现明显指数增长,判为阳性。否则为阴性。

结果阴性

Ct>38或者No Ct,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。

【注意事项】

1. 使用本试剂盒的实验室,应严格按照国家有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理。

2. 各区域物品均为用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁消毒。

3. 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡。上机,应注意检查各反应管是否盖紧,以免液体蒸发造成结果不准确。

4. 检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10%次氯酸的废液缸内,检测结束的PCR反应管,切忌开盖,并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。

5. 工作台及各种实验用品应定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒。

6. 试剂使用应在常温下充分融化并混匀。不同批号的试剂请勿混用,并在有效期内使用。

【储存条件与有效期】

试剂盒应置于-20℃冷冻避光贮存;

试剂盒保存有效期为12个月;

试剂盒反复冻融次数不宜超过5次。

 

原创作者:上海远慕生物科技有限公司


标签:禽流感病毒H7亚型荧光RT-PCR检测试剂盒   PCR试剂盒   
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