塞内卡病毒荧光RT-PCR检测试剂盒

详细内容

产品名称：塞内卡病毒荧光RT-PCR检测试剂盒

规 格：50T/盒
反应体积：25μL
试剂类型：液体

产品简介：塞内卡病毒（Seneca virus A, SVA），曾被称为塞内卡谷病毒（Seneca valleyvirus, SVV），为无囊膜的单股正链 RNA 病毒，是小 RNA 病毒科塞内卡病毒属成员，基因组全长约 7.2kb。SVA 主要导致发病猪蹄部和口鼻出现水疱、溃烂、跛行；新生仔猪出现腹泻、神经症状并引起急性死亡，死亡率在 15%~30%。目该病在我国个别地区零星散发，有流行扩大的趋势，对我国生猪产业造成潜在威胁。本产品是基于染料法荧光定量 PCR 原理开发，门检测塞内卡病毒的试剂盒。它具有下列特点：

1. 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据塞内卡病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 基于染料法 qRT-PCR 检测，灵敏度比常规 RT-PCR 高 10-100 倍，可以达到至少 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 qRT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床

【使用方法】

一、试剂准备（在试剂准备区进行）

1. 取出包装盒中的各组分，室温放置，待其完全融化，混匀后备用。

2. 根据待测样本、阴性对照、阳性对照的数量，按下表1单反应体系配制方法，取相应量的试剂，充分混匀成PCR-Mix，按照20 μL/反应分装到PCR反应管中，瞬时离心后备用。

表1：单反应体系配制方法

二、样本准备（在样本准备区进行）

1. 使用商品化的病毒核酸提取试剂盒，参照说明书进行操作，提取好的核酸样本如不能立即检测，建议-70℃以下保存。

2. 取出样本后混匀，将阴性对照、待测样本、阳性对照各5 μL加入到PCR反应管中混匀。

3. 盖上管盖，2000 rpm离心30。

4. 将PCR反应管转移到扩增区进行上机。

三、PCR（在核酸扩增区进行）

1. 将上述PCR反应管按照实验布局依次放入PCR仪对应检测孔内，并记录顺序。

2. 按表2设置PCR扩增循环参数。

表2：PCR扩增相关参数

【结果分析】

表3：结果分析表

【注意事项】

1. 使用本试剂盒的实验室，应严格按照国家有关基因扩增检验实验室管理规范进行管理。

2. 各区域物品均为用，不得交叉使用，以免污染。检测结束后，应立即对工作台进行清洁消毒。

3. 吸取反应液时，应尽量避免产生气泡。上机，应注意检查各反应管是否盖紧，以免液体蒸发造成结果不准确。

4. 检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有10%次氯酸的废液缸内，检测结束的PCR反应管，切忌开盖，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。

5. 工作台及各种实验用品应定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒。

6. 试剂使用应在常温下充分融化并混匀。不同批号的试剂请勿混用，并在有效期内使用。

【储存条件与有效期】

试剂盒应置于-20℃冷冻避光贮存；

试剂盒保存有效期为12个月；

试剂盒反复冻融次数不宜超过5次。

原创作者：上海远慕生物科技有限公司

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