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P1099/pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载)

点击次数：278 发布时间：2019/4/23

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公司名称：上海远慕生物科技有限公司型号：生产地址：中国大陆已获点击：278 简单介绍：产品名称:P1099/pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载)
产品特点：是染色质外的双链共价闭合环形DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300kb之间，<15kb的小质粒比较容易分离纯化，>15kb的大质粒则不易提取。

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上海远慕生物科技供应人源基因质粒，专业供应抗生素、维生素、培养基、染色剂、酶/辅酶、碳水化合物、分离试剂、缓冲试剂、核酸及衍生物、氨基酸/蛋白质等其它生化试剂。品质保证，货源充足。各种包装规格，并可提供包装定制，欢迎来电咨询。

产品名称:P1099/pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载)

产品名称:pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载)

供应商：上海远慕

质粒大小:5216bp

质粒标签:N-g3 signal，C-E tag

原核抗性:氨苄青霉素Amp

克隆菌株:大肠杆菌TG1

培养条件:37℃，有氧，LB
产品特点：是染色质外的双链共价闭合环形DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋结构，不同质粒大小在2-300kb之间，<15kb的小质粒比较容易分离纯化，>15kb的大质粒则不易提取。

产品简介:

本系统是用于抗体基因表达，制备重组抗体。宿主菌 TG1 为质粒载体pCANTAB5e 复制和表达的宿主菌，无抗性，用 2×YT 培养基，37℃进行培养。载体 pCANTAB5e 为用于构建重组单链抗体 scFv 的载体，具有氨苄抗性，大小为4522bp，具体图谱及酶切位点如下示。辅助噬菌体 M13K07 用于拯救噬菌粒，具有卡那抗性，在其辅助下噬菌粒得以复制，并以融合的形式表达在噬菌体表面。在 scFv 基因后面含有一段编码 Tag 尾肽（E-Tag）的序列，在尾肽后面有一琥珀（Amber）终止密码子，位于 scFv 基因与 cpIII 基因之间，在抑制型细菌 TG1 中，这种琥珀密码子只有 20％有效，故在蛋白翻译过程中可以通读而形成 scFv-cpIII融合蛋白；但在非抑制型菌株中，如 HB2151，此终止子被识别，同时 scFv 基因在翻译过程中在 cpIII 基因前终止，形成独立的抗体蛋白，滞留于细胞膜间隙，并在长时间培养后泄漏在培养液中，形成可溶性表达。
【操作方法】本方法来源于网络，本平台未做实验证实，仅供参考。
1. 辅助噬菌体毒种制备
1) 将辅助噬菌体 M13K07 划线于 2×YT 琼脂平板上；
2) 制备 2×YT 半固体琼脂（0.7％琼脂）为上层琼脂（Top Agar），冷却至 50 ℃时，取 4 mL Top Agar 并加入 0.5 mL 过夜培养的新鲜 TG1 菌（OD660 达 0.8），充分混匀，沿着划线浓度从低至高的方向，倾注 Top Agar；
3) 37℃培养 6-12 小时，用接种针挑取单个噬菌斑，接种于 30-200 mL 2×YT-K（kanamycin 70 μg/mL），37℃充分振荡培养 10-14 小时；
4) 8000 rpm 离心 15 min，4 ℃；
5) 小心取上清，建议用 0.45μm 滤膜过滤后，分装无菌小管，存放 4℃至少可用半年。
2．噬菌体毒种的滴定
1) 准备不含任何抗生素的 2×YT 培养平板 5-6 个；
2) 用 2×YT 培养基配制 0.7%琼脂平板，即为表层琼脂（Top Agar），冷却至 42℃并在 42℃恒温保存；
3) 将上述噬菌体溶液用培养基做 10-6、10-7、10-8、10-9、10-10 稀释；
4) 取过夜培养的 TG1 菌液（OD660=1 左右），分装小试管，500μL /小试管，标明10-6 至 10-10 稀释度；
备注：宿主菌的制备请参照 TG1 菌株说明书进行。
5) 加入以上步骤 3 中依次稀释的噬菌体 100μL 到每个相应的标准稀释度的试管中，充分混匀，37℃轻柔振荡反应 30 min；
6) 加入 Top Agar 3 mL 至每个试管中，立即浇注事先准备好的平皿，37℃培养过夜；
7) 计算平皿上的空斑数，乘于相应稀释倍数，一般浓度可达 1012pfu/mL。
【注意事项】
1．噬菌体毒种，在使用前应按以上推荐的方法进行浓度滴定；

2．噬菌体毒种存放在 4℃下即可，不可-20℃或更低温度冻存；

P1099/pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载) 质粒分类:

1.根据质粒能否通过细菌的接合作用，可分为接合性质粒和非接合性质粒。接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。

2.根据质粒的不相容性，可分为不相容性和相容性。不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象，反之为相容性。常用于流行病学的调查。

3.根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类：严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用，只能在细胞周期的一定阶段进行复制，当细胞染色体停止复制时，质粒也就不再复制。松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响，在整个细胞生长周期中随时都可以复制，在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。

P1099/pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载) 产品简介:

质粒（plasmid）是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成，质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的质粒。与天然质粒相比，质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因（如抗生素抗性基因）和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。

产品特色优势：

1. 国内对照品行业领导者，长达14年对照品的专业研发及标准制定

2. 高效稳定的纯化技术-高速逆流色谱技术的运用

3. 特有的高速逆流色谱对照品研发中心及生产中心，保证对照品的质量可控性及批量生产的稳定性

4. 严格的质量控制，通过全面的检测（1HNMR 13CNMR MS HPLC）

5. 部分对照品已获得国家质量监督检验检疫总局颁发的标准物质证书

6. 完善的库存及供应体系，所有产品均能现货供应

7. 高效的销售团队，99%的咨询可即时回复

订购流程

1、绝大部分产品备有现货，一般情况下都能订货当日发货。

2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。

3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日价格为准。

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联系人：俞燕熙
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