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5-核苷酸酶(5-NT)检测试剂盒(钼蓝微板法)

点击次数:155  发布时间:2019/5/28

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公司名称:上海远慕生物科技有限公司 型 号: 生产地址:中国大陆 已获点击:155 简单介绍: 5´-核苷酸酶(5´-NT)检测试剂盒(钼蓝微板法),AMP作为底物,在MAO的作用下生成苄醛,后者与经过氧化生成苯腙,呈红棕色。通过酶标仪检测680nm处吸光度。
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产品名称:5´-核苷酸酶(5´-NT)检测试剂盒(钼蓝微板法)
规格:50T/100T
供应商:远慕生物
分类:酶类检测
储存方式:4℃,避光,6个月
产品用途:又称钼蓝显色法,定量检测血清、血浆、组织等样品中的6′-核苷酸酶活性
注意事项:AMP作为底物,在MAO的作用下生成苄醛,后者与经过氧化生成苯腙,呈红棕色。通过酶标仪检测680nm处吸光度。



试剂注意事项:
①试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
②实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
③使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
④加入试剂的顺序一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
⑤按说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。



 操作注意事项:
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。



5´-核苷酸酶(5´-NT)检测试剂盒(钼蓝微板法) 常见问题以及解决方法:
1、试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻;
2、加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理;
3、洗板时容易造成误差: 因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动;
4、显色问题: 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况;
5、终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒;
6、读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净;
7、严格按照说明书操作。



5´-核苷酸酶(5´-NT)检测试剂盒(钼蓝微板法) 操作步骤:
1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50?l。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40?l,然后再加待测样品 10?l。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50?l,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂 A50?l,再加入显色剂 B50?l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10.终止:每孔加终止液 50?l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

原创作者:上海远慕生物科技有限公司


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