详细内容
产品名称:腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏微板法)
规格:50T/100T
供应商:远慕生物
分类:酶类检测
储存方式:4℃,避光,6个月
产品用途:定量检测血清、血浆、组织等样品中的腺苷脱氨酶活性
注意事项:微板法,腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷水解脱氢,产生铵离子。通过酶标仪检测540nm处吸光度。
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏微板法) 常见问题以及解决方法:
1、试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻;
2、加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理;
3、洗板时容易造成误差: 因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动;
4、显色问题: 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况;
5、终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒;
6、读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净;
7、严格按照说明书操作。
腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏微板法) 操作步骤:
1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50?l。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40?l,然后再加待测样品 10?l。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50?l,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂 A50?l,再加入显色剂 B50?l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10.终止:每孔加终止液 50?l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
检测试剂注意事项:
1. 此试剂为体外检测试剂,效期内使用,试剂应视为传染物,不同总批号的试剂不能混用。
2. 使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟,
3. 浓缩洗涤液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟。
4. 浓缩样品稀释液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟
5. 若24小时内进行实验,标本可存放于2~8℃。不需及时实验,标本-20℃保存,避免反复冻融。
6. 在反复清洗微孔板,并扣干微孔中的残余液体,否则将降低精确度,造成吸光度偏离的假像。
7. 加样完毕后,应注意轻微摇动微孔反应条,以便使孔中的液体充分混匀。
8. 试剂盒保存于2~8℃,请勿冷冻,有效期请见盒内标示。
操作流程:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,*终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
原创作者:上海远慕生物科技有限公司
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