详细内容
产品名称:总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)
规格:50T/100T
供应商:远慕生物
分类:生化检测
储存方式:4℃,避光,12个月
产品用途:用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。
注意事项:又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等,血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇,2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯,后者被CEH水解为游离胆固醇,后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮,并产生过氧化氢,再经过氧化物酶(POD)催化,使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应,生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)。分光光度计在500~520nm处进行比色测定。
试剂注意事项:
①试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
②实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
③使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
④加入试剂的顺序一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
⑤按说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法) 常见问题以及解决方法:
1、试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻;
2、加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理;
3、洗板时容易造成误差: 因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动;
4、显色问题: 使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况;
5、终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒;
6、读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净;
7、严格按照说明书操作。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法) 操作步骤:
1.编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2.加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50?l。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40?l,然后再加待测样品 10?l。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50?l,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂 A50?l,再加入显色剂 B50?l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10.终止:每孔加终止液 50?l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
检测试剂注意事项:
1. 此试剂为体外检测试剂,效期内使用,试剂应视为传染物,不同总批号的试剂不能混用。
2. 使用前应将盒内各试剂取出。室温放置至少30分钟,
3. 浓缩洗涤液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟。
4. 浓缩样品稀释液出现结晶后,请于37℃孵育15分钟
5. 若24小时内进行实验,标本可存放于2~8℃。不需及时实验,标本-20℃保存,避免反复冻融。
6. 在反复清洗微孔板,并扣干微孔中的残余液体,否则将降低精确度,造成吸光度偏离的假像。
7. 加样完毕后,应注意轻微摇动微孔反应条,以便使孔中的液体充分混匀。
8. 试剂盒保存于2~8℃,请勿冷冻,有效期请见盒内标示。
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原创作者:上海远慕生物科技有限公司
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